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转基因小鼠肝癌细胞株的建立及生物学特性研究 |
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吴震宇 陈诗书
中国图书分类号 R392.11 R73.3
摘 要 目的：将细胞因子基因尽快应用于临床基因治疗。方法：用逆转录病毒载体pLXSN将小鼠γ-干扰素基因(mIFN-γ)导入小鼠肝癌细胞株，建立了转基因的肝癌细胞株H22-mIFN-γ，对该细胞株的生长、形态结构、DNA含量及细胞周期的变化、γ-干扰素的分泌、细胞的免疫原性及致瘤性等生物学特性进行了研究。结果：发现该株细胞的生长、形态结构、DNA含量及细胞周期均无明显改变，细胞能分泌一定活性的γ-干扰素，MHC II类抗原的表达量增加，细胞致瘤性明显下降。结论：为进一步开展异体乃至自体瘤苗进行基因治疗创造了条件。
关键词 小鼠γ-干扰素 肝癌细胞 逆转录病毒载体 MHC II类抗原 致瘤性
The construction of transgene mouse hepatoma cell line and study
on biological characteristics
WU Zhen-Yu,CHEN Shi-Shu
Research Center for Human Gene Therapy, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025
Abstract Objective：In order to apply cytokines to clinical gene therapy earlier.Methods：Transduced mouse interferon-γ(mIFN-γ)gene into mouse hepatoma cell line H22 with retroviral vector LXSN. Results：There were no obvious changes in cell morphology,cell growth,cell cycle and DNA content of mIFN-γ gene modified cells.MHC Ⅱ antigen expression had increased in H22-mIFN-γ cell by indirect fluorometry and the tumorigenicity decreased significantly in H22-mIFN-γ cells.Conclusion：The transduction of mIFN-γ gene can increase the immunogenicity of hapatoma cells,which is the base of application of tumor vaccine to clinical gene therapy.
Key words Mouse interferon-γ Hepatoma cell Retroviral vector MHC II antigen Tumorigenicity
γ-干扰素以其独特的抗肿瘤特性一直深受人们的重视，随着基因治疗研究工作的不断深入，将包括γ-干扰素在内的众多细胞因子作为目的基因导入肿瘤细胞进行自体或异体转基因瘤苗的研究及基因治疗，这方面已开展了大量的工作［1］。肝癌在我国属于高发病症，其死亡率在各种恶性肿瘤的发病率中排列第二［2］，我们用逆转录病毒载体将小鼠γ-干扰素基因导入小鼠肝癌细胞并对其生物学特征进行了研究，希望能为找到将γ-干扰素基因用于细胞因子基因治疗的新方法打下一定基础。
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料 小鼠γ-干扰素标准品(Sigma)；FITC标记的兔抗大鼠免疫球蛋白(北医大)；H-2 II类大鼠抗小鼠单抗(二军大)；LIPOFECTAMINE(GIbco)；pLXSN由Miller博士提供；PA317、H22细胞由本室传代保存。
1.2 包装体系PA317-mIFN-γ的建立 pL(mIFN-γ)SN由本室构建(另文发表)，按LIPOFECTAMINE操作手册转染包装细胞PA317、G418筛选，得到PA317-mIFN-&gamm[1] [2] 下一页
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