|
人胎盘泌乳素乳胶诊断试剂盒的研制 |
| |
后的乳胶为乳白色颗粒，直径约为0.8 μm，可采用高速离心进行颗粒筛选。
1.4 羧化乳胶的化学改性［1］ 将合成的乳胶经离子交换和离心除去水溶性物质，包括表面活性剂、无机盐、可溶性高分子聚合物、非电解质等，然后按比例加入HOBT和EDC，目的是将羧基化乳胶进行化学改性，使羧基变成活泼脂基团，使免疫活性物质能与乳胶联接牢固。
1.5 乳胶同提纯后的HPL抗血清联接 取化学改性的乳胶,用甘氨酸缓冲液(GBS)配成20%浓度, 分别加入1,2, 4mg/ml不同浓度的HPL抗血清, 在56℃恒温水浴振荡反应24 h, 使HPL抗血清能充分同乳胶联接, 经10 000r/min, 30min离心洗涤3次, 洗涤液为加入1%兔血清的GBS,恢复原体积, 加入0.1%NaN3防腐。
2 结果
2.1 致敏乳胶的自凝检测 在黑色背景的玻片上画2.5～3.0 cm大小的漆圈为反应板，将3批致敏HPL抗血清的乳胶分别配成1%浓度，各加入反应板圆圈内1滴（约30 μl）。再加入GBS缓冲液1滴，慢慢摇动反应板3～5 min，在明亮的光线下观察各不同致敏浓度是否有自凝现象。经过检测，3个致敏浓度以2 mg/ml的致敏浓度为最佳，同GBS缓冲液无凝集，乳胶颗粒均匀，大小一致。
2.2 非特异性凝集检测 将38例正常男性血清,分别稀释20、40、80倍，分别加入反应板1滴，再加入2 mg/ml致敏HPL抗血清乳胶1滴，连续慢慢摇动3～5 min，观察是否有凝集反应。经测定38例男性血清各稀释倍数均无凝集反应，说明致敏的HPL抗血清乳胶同正常男性血清无非特异性凝集反应。
2.3 致敏乳胶的敏感度检测 将提纯的HPL参考标准抗原，用GBS稀释成不同浓度［2］，分别加在反应板1滴，再加入致敏乳胶1滴。慢慢摇动反应板5 min，观察各浓度的凝集反应，以出现凝集的最低标准液浓度或标准液的最高稀释倍数为判定终点，经过测定，乳胶的敏感度为0.125 mg/L。凝集明显,颗粒均匀,界线清楚。
2.4 致敏乳胶的稳定性检测 将致敏的乳胶试剂, 在4℃冰箱内放置6个月后进行测定, 乳胶的敏感度和清晰度均未发生改变。效价稳定，无自凝发生，说明致敏的乳胶试剂稳定性符合要求。
2.5 hpl乳胶法与hpl单向免疫扩散法的比较 将183例37～42孕周的孕妇血清,分别稀释为20、40、80倍，取各浓度血清1滴，加在反应板上，再分别加入2mg/ml致敏的乳胶液1滴，摇动反应板，5 min后判定结果，以出现明显凝集颗粒为判定终点，根据乳胶法的敏感度为0.125 mg/L,乳胶法半定量测定的HPL值为20倍2.5 mg/L，40倍5mg/L，80倍10mg/L。以20倍为危险值，40倍为异常值，80倍为正常值。同HPL单向免疫扩散法进行对照比较，单向免疫扩散法6 mg/L以下为异常值，6mg/L以上为正常值，结果见表1。
随机抽取50例进行两种方法的相关性比较,结果两法测值呈高度相关, 相关系数r=0.611，P<0.001, 其直线回归方程y=3.645+0.3184x［5］。
表1 乳胶法与单向免疫扩散法测定HPL值比较
Tab.1 Comparison of hpl concentration between Latax agglutination and single immunodiffusion
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 双抗HBsAg抗体夹心时间分辨免疫荧光分析方法的建立
下一个医学论文： 肝素诱导结晶紫比色法检测成纤维细胞生长因子的生物活性
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文