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慢性缺氧对大鼠肺内细胞增殖 凋亡及相关基因表达的影响 |
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陶清国 张珍祥 徐永健
摘 要 目的：探讨慢性缺氧性肺动脉高压肺血管结构改建(pulmonary vascular structural remodeling, PVSR)的细胞及分子机制。方法：大鼠慢性缺氧模型复制，免疫组化及Northern杂交检测大鼠肺内c-myc及bcl-2两基因蛋白及mRNA的表达，免疫组化及原位缺口末端标记法检测大鼠肺内增殖相关抗原Ki-67及凋亡细胞。结果：正常及慢性缺氧大鼠肺内均检出一定比率的增殖或凋亡细胞，缺氧1、2周大鼠肺内细胞增殖/凋亡比值比对照组分别增高约3、3.5倍。与细胞增殖、凋亡密切相关的c-myc、bcl-2基因表达在缺氧1周大鼠肺内显著增高，在缺氧2周更显著。结论：细胞增殖、凋亡机制共同参与了慢性缺氧性肺动脉高压时PVSR的调节。
主题词 低氧；肺；基因表达；大鼠
Effects of chronic hypoxia on cell proliferation, apoptosis and
expression of c-myc and bcl-2 in lungs of rats
TAO Qing-Guo, ZHANG Zhen-Xiang, XU Yong-Jian
Respiratory Diseases Research Laboratory, Tongji Hospital, Tongji Medical University, Wuhan(430030)
Abstract AIM:To study the cellular and molecular mechenism of pulmonary vascular structural remodeling (PVSR) in hypoxic pulmonary hypertension. METHOD：In situ terminal labeling for detection of apoptotic cells, Northern blot and immunohistochemical technique for detection of c-myc, bcl-2 expression. RESULTS：Compared with control, the ratio of cellular proliferation to apoptosis in lungs of rats exposed to chronic hypoxia is increased significantly, and so is expression of c-myc and bcl-2. CONCLUSION：Cellular proliferation and apoptosis that are regulated by c-myc and bcl-2 contribute to the regulation of PVSR.
MeSH Anoxia; Lung; Gene expression; Rats
PVSR是慢性缺氧性肺动脉高压发生的最重要环节之一，它给肺动脉高压的治疗带来了极大的困难。PVSR总的病理特征是肺血管壁细胞(平滑肌及成纤维细胞)增殖及合成细胞外基质增多［1］，对其发生的细胞及分子机制认识还不尽清楚。有关PVSR细胞增殖调节机制已有一些研究报道，但细胞凋亡机制是否参与则未见于文献。Cho等［2］认为新生羊出生后体内动脉发育(改建)过程受细胞增殖与凋亡双重机制调节，为探讨缺氧性PVSR是否亦如此，我们对慢性缺氧性大鼠肺内细胞进行了增殖与节凋亡综合分析，同时研究相关基因c-myc、bcl-2表达情况，以进一步明确PVSR的发生机理。
材料与方法
(一)动物与缺氧模型复制：250 g～300 g雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组、缺氧1周组，缺氧2周组，每组6只，缺氧用常压间断缺氧模型［3］，缺氧浓度10%左右，每天8 h。
(二)取材和组织准备：在缺氧1、2周动物处死后，经无菌操作取新鲜肺组织一块用以提RNA。其余肺组织分为二部分，一块经PBS缓冲液漂洗数次以去掉组织中血液，立即置于液氮中快速冷冻，包埋后行冰冻切片，后用10%中性福尔马林液固定30 min以备组化分析。另一块漂洗后经10%中性福尔马林固定行常规石蜡切片备作组化、凋亡及弹力纤维染色。参照文献报道方法［3］称取右心室(R)、左心室(L)及室间隔(S)重量，[1] [2] 下一页
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