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家蚕分子连锁图谱的构建及分子标记育种研究进展 |
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Y、N11、od和sch等几个形态基因相连锁〔7〕。争取构建300余个RAPD标记与RFLP标记、SADF标记及形态学、同工酶等标记整合，可望构建400～500个标记的高密度家蚕连锁图谱。日本学者安河内佑二等用多种分子标记及同工酶等标记构建的蚕的高密度连锁图，其标记数已达400余个，与常规遗传图确立对应关系的有7个连锁群。
1.3 SADF构图
SADF技术与AFLP技术在设计原理上相同，但SADF是对单酶切的基因组DNA经PCR扩增后的限制性片段进行选择，并可用琼脂糖凝胶电泳进行检测。同样具有AFLP的高重复性与稳定性，同时它具有RAPD的优点，又克服了RAPD技术重复性与稳定性不够高的弱点。目前我室用此法已构建了80余个SADF标记(未发表)，它可与其它分子标记相整合。
2 家蚕QTL定位
动植物的一些主要经济性状和生理性状差不多都是数量性状。它的变异是呈连续的正态分布，受微效多基因控制，QTL定位实际上就是对数量性状的主基因定位，微效基因定位迄今无法进行。可用于QTL定位的遗传标记现有形态标记、同工酶标记、RFLP标记、RAPD标记和SADF标记，分子标记(特别是RAPD标记)与形态标记与同工酶标记相比具有极大的丰富性和致密性，从而提高了QTL或形态标记位点定位的可靠性、实用性和重复性。谭远德等已将茧长和茧层量的主基因Q（1）～q（1）及Q（w）～q（w）分别定位在Z染色体上的两个性连锁的形态标记基因赤蚁（sch）和油蚕（od）的两侧，其中Q（1）～q（1）位于sch基因一侧，相距74.25cM（重组为0.4512）；Q（w）～q（w）位于od基因一侧，相距54.87cM（重组为0.3998）。全茧量的一个主基因Q（wc）～q（wc）与sch基因紧密连锁未发生交换，故与sch基因具有同一位点〔8〕。另外，何克荣等确定在家蚕第11染色体上存在一个影响全茧量的基因位点，它与龙角基因位点的重组率约0.25，且该位点带有显性效应[μq（1）μq（0）]〔9〕。
3 家蚕分子标记育种的准备
3.1 质量性状基因分子标记的定位
家蚕的强健性、育性、化性和某些抗逆性等重要生产性状多表现为质量性状遗传的特点，依靠传统的育种手段, 利用表型选择目标质量性状有许多困难，利用与目标质量性状基因紧密连锁的分子标记是进行质量性状选择的有效途径。标记目标质量性状基因的方法目前主要有两个：一是利用Michelmore等提出的分离群体分组分析法（Bulked Segregant Analysis，简称BSA）〔10〕。该法是将F2分离群体中研究的目标性状据其表型(如抗病、感病)分成两组，将两组个体的DNA混合提取，并用作模板进行RAPD分析。如果某一引物扩增的两个群体的DNA表现出多态性，则表明该引物的扩增产物与目标性状基因连锁(其连锁距离在15cM以内)。然后再用筛选出有连锁关系的几个引物对分离群体的个体DNA进行扩增，找出其中连锁关系更密切的分子标记。常可将该标记带克隆、测序并设计一对新的引物（20bp左右），再进行PCR特异扩增，结果更可靠；二是根据已有的连锁进行标记，一旦发现目标基因被定位在某一染色体上，就可选择分散在染色体上不同位点的标记，逐渐逼近，于是可很快找到该基因的分子标记。
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