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体外同种异体细胞刺激诱导出免疫抑制 |
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经37℃5％CO2环境中培养2 h，单核细胞便粘附于孔底，吸弃上清，用纯RPMI1640液洗3次去除非粘附细胞后，加上患者的淋巴细胞100 μl/孔，于37℃5％CO2环境中培养6 d或2 h，然后吸出患者淋巴细胞备用。对照细胞在同样的培养液中单独培养6 d或2 h后吸出备用。
1.3 ConA淋转试验 取经丈夫单核细胞刺激过的患者淋巴细胞和患者对照淋巴细胞各1ⅹ105，分别加人ConA 5 μg，在200 μl含20％小牛血清的RPMI1640培养液中于37℃5％CO2环境中培养3 d。阴性对照为上述两种细胞不加ConA分别培养，所有实验组均设3复孔，培养终止前16 h，每孔加3H-TdR 1 μCi，然后收集细胞，测定并计算平均cpm值，最后结果以刺激指数SI
表示。
1.4 MLC上清抑制试验 取患者淋巴细胞为反应细胞，患者丈夫淋巴细胞经60Co 3 000 rad 照射后作刺激细胞，两者混合(各5ⅹ104)于含20%AB血清的RPMI1640(100 μl)培养液中，37℃5%CO2环境培养，6 d以后取其上清，以20 μl/孔的液量加至无关个体间的MLC，观察后者MLC的反应强度变化，并按下式计算上清抑制率。阴性对照为无关个体反应细胞加培养液。
上清抑制率=
2 结 果
2.1 患者淋巴细胞经丈夫单核细胞刺激后对ConA的反应 本实验在体外以丈夫单核细胞刺激患者淋巴细胞模拟临床上主动免疫治疗(治疗组)，用RPMI1640培养的患者淋巴细胞作阴性对照模拟未治疗组，然后观察二者对ConA的反应。表1结果显示：预先用丈夫单核细胞刺激患者细胞，无论培养6 d还是2 h，都能降低患者淋巴细胞对ConA的反应，两者与对照组相比均有非常显著的差异(P<0.001)。
表1 患者淋巴细胞经丈夫细胞刺激后对ConA的反应
Tab.1 The reactivities of patients′ lymphocytes to ConA after stimulated by their husbands′ monocytes
Lymphocytes
of patients Cultured in
1640 for
6 days Cultured with
husbands′monocytes
for 6 days Cultured in
1640 for
2 hours Cultured with
husbands′monocytes
for 2 hours
Number 20 20 8 8
Reactivities
to ConA (SI) 10.4±7.1 5.5±3.1 40.1±14.1 16.8±9.4
P＜0.01 P＜0.002
表2 患者夫妇MLC上清对无关个体间MLC的抑制作用
Tab.2 The suppressive effects of superior liquids(SL) of MLC between patients and their husbands
MLC of unrelated
donors (No) Control
(cpm) MLC
(cpm) MLC in SL
(cpm) Suppressions
of SL (%)
1 182 9 567 3 638 63.18
2 167 10 219 5 621 36.79
3 3 443 28 013 17 182 39.52
4 171 14 415 10 021 30.85
5 664 35 630 18 688 51.25
6 3 989 25 076 18 329 32.00
7 2 166 59 367 41 353 31.50
8 314 22 003 14 386 35.12
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