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抗BrdU单克隆抗体的制备及初步鉴定 |
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李新明 何荣根 王红 徐癨 周晓健 赵学礼
中国图书分类号 R392.11
溴脱氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)是DNA前体胸腺嘧啶核苷的类似物。通过检测BrdU掺入S期细胞DNA的基因片段，可避免用同位素标记所产生的放射性污染等副作用。本文在过碘酸氧化法偶联抗原的基础上，已制备出具有均一分泌活性的抗BrdU单抗——1aB3、3aD9、4aF8，并经过初步鉴定。
1 材料与方法
1.1 材料 溴尿嘧啶核苷(BrU)、碘尿嘧啶核苷(IU)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(Ova)均购自中科院上海生化所；50%PEG，4 kD，德国Merck公司；免疫球蛋白标准血清，美国Sigma公司；酶联免疫吸附测定仪，日本Biorad;Balb/c小鼠，中科院上海实验动物中心。
1.2 方法 用过碘酸氧化法将半抗原IU分别与载体Ova或BSA化学偶合；再将BrU分别与Ova或BSA化学偶合。用偶合Ova的抗原免疫小鼠，偶合BSA的抗原行载体抑制试验及抗体效价检测。常规免疫小鼠，细胞融合，克隆筛选及抗体生产。用ELISA间接免疫法检测。聚苯乙烯板抗原包被浓度为5 μg/ml。
2 结果
融合细胞经6次克隆化培养，获得3株抗体分泌持续阳性的细胞株，分别命名为1aB3、3aD9、4aF8。经琼酯免疫双扩散试验，3株细胞产生的小鼠腹水分别与IgG和IgG1标准血清间出现沉淀线，与其它标准血清间未见有沉淀线出现，证实本文1aB3株、3aD9株和4aF8株所分泌的单抗均为IgG1亚类。用ELISA间接免疫法测定单抗效价，1aB3为1∶3.2×104；3aD9和4aF8分别为1∶1.6×104。3株克隆细胞所产生腹水的特异性见表1。
表1 BrdU单抗的特异性
Tab.1 Character of BrdU monoclone antibodies
McAb Antigens
BSA Ova BSA-IU Ova-IU IU1) Ova-BrU BrU1)
1aB3 - - + + - + -
3aD9 - - + + - + -
4aF8 - - + + - + -
Note:1)show no effect
3 讨论
细胞杂交制备McAb已成为十分普及的技术。然而，用小分子核苷半抗原制备McAb有许多难点，IU或BrU的分子量仅0.3 kD左右，这或许是本文所得McAb的效价较低的重要原因之一，今后需进一步努力和探讨。半抗原IU和BrU为生化合成的纯品，且经过抗血清载体抑制试验和腹水McAb的特异性检测，完全可排除Ova和BSA的载体影响。IU和BrU仅在尿嘧啶碱基的5位更换1个增加的卤素原子，对抗原分子的空间构型没有改变，抗原决定簇的化学功能基团也无变化，因此，不影响抗原分子表达的特异性。吸附蛋白是聚苯乙烯板的重要特性，BrU或IU核苷半抗原单独包被无效，说明未被吸附或吸附不牢被洗脱所致。抗BrdU单克隆抗体的成功制备对非放射性标记物BrdU替代3H-TdR应用奠定了基础，在生物学和医学领域有广泛实用价值。
作者简介：李新明，男，42岁，博士，副教授，主要从事口腔颌面外科及肿瘤细胞生物学研究；
何荣根，男，63岁，博士生导师，主要从事肿瘤生物学研究
作者单位：李新明 (河南医科大学一附院口腔颌面外科，郑州450052)
何荣根 王红 徐癨 周晓健（上海第二医科大学九院口腔颌面外科，上海200011）
赵学礼 (河南开封医专附属医院检验科，开封475000)
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