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呼吸道感染性疾病与单核细胞ADCC效应变化关系的研究 |
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黄 瑾 王秀丽 林树青
呼吸道感染是世界范围内发病率最高，与人民健康紧密相关的疾病，许多变态反应参与的疾病与呼吸道感染关系密切，而病原微生物感染呼吸道后引起免疫功能发生变化较早的是单核/巨噬细胞，它除对病原体有非特异吞噬作用外，尚有特异性杀伤功能，即抗体依赖细胞介导的细胞毒(antibody dependent cell mediated cytotoxicity, ADCC)作用。本文通过了解呼吸道急、慢性感染不同阶段单核细胞ADCC效应变化，探讨单核/巨噬细胞ADCC效应在呼吸道感染性疾病中所发挥的作用。
方法
1.检测对象：急性上感病人55例，其中发热者44例(男21例，女23例，年龄20～61岁)；不伴发热者11例(男6例，女5例，年龄24～58岁)；慢性支气管炎急性发作期病人34例(男20例，女14例，年龄38～72岁)。上述病人均为我院门诊及住院病人。健康对照组40例，男28例，女12例，年龄28～65岁，为中心血站健康献血员及本院工作人员。
2.细胞株、试剂及动物：CTLL2细胞株为本室长期传代培养。rhIL-2为卫生部长春生物制品所产品。酶标羊抗兔IgG和LPS为北京军事医学科学院产品。兔抗CTLL2细胞抗血清为本实验室自制。CBWR/B兔为本校动物中心提供。
3.方法：参照文献制备兔抗CTLL2细胞抗血清，用CELL-ELISA方法测定免疫兔血清抗体特导性。无菌分离提取外周静脉血单核细胞作为效应细胞，CTLL2细胞作为靶细胞，按下述实验分组设计加样：(1)CTLL2细胞增殖标准对照组；(2)抗血清非特导毒性对照组；(3)单核细胞非特异杀伤对照组；(4)单核细胞ADCC效应实验组；(注：上述各组均加入rhIL-2 100 U/mL,测定单核细胞体外活化后ADCC效应用LPS浓度为300 μg/L，活化单核细胞时间为24 h)。分组加样后置37℃ CO2孵箱中培养72 h，用改良的MTT比色法检测结果。
4.实验结果计算与统计：CTLL2细胞增殖标准对照组细胞增殖数按直线回归方程式计算，确定A(OD)值与细胞数的相关性。单核细胞ADCC效应组增殖的CTLL2细胞数按下述公式计算：
AADCC＝At-(Ac-As)-(Ac-Am)
=At-(2Ac-As-Am)
AADCC：单核细胞ADCC效应组实际A(OD)值；
At：单核细胞ADCC效应组测得A(OD)值；
Ac：CTLL2细胞增殖标准对照组A(OD)值；
As：抗血清非特异毒性对照组A(OD)值；
Am：单核细胞非特异杀伤对照组A(OD)值。
将AADCC代入CTLL2细胞增殖直线方程中，计算出ADCC效应组CTLL2细胞增殖数，最后用细胞增殖标准对照组细胞数减去ADCC效应组细胞增殖数计算出ADCC效应组被杀伤细胞数。上述计算均利用自编计算机程序计算完成。数据用表示，用t检验。
结果
1.各组病人及健康人单核细胞未受刺激前ADCC效应和非特异杀伤效应测定结果(表1)。结果显示：(1)有发热症状的急性上感病人单核细胞ADCC效应高于健康对照组(P＜0.05)，而急性上感不伴发热病人组及慢支病人组低于健康对照组(P＜0.01，P＜0.05)；(2)急性上感病人无论有无发热症状单核细胞非特异杀伤效应均高于健康对照组(P＜0.01)，而慢性支气管炎病人无明显变化。
表1 各组病人单核细胞ADCC及非特异杀伤
效应检测结果
Tab 1 The ADCC effect and unspecialized cytotoxicity of monocyte
in the patients (No. of cells killed×104,)
Group n ADCC effect unspecialized
cytotoxicity
Upper respiratory tract
infection with fever 23 1.71±0.94* 1.00±0.56**
Upper respiratory tract
infection without fever 11 0.39±0.[1] [2] 下一页
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