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利用PCR |
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杨平 Martin Armstrong 戴德哉 Walter Luyten
摘要:人类MINK基因的两种突变导致长QT综合征（LQTS）。我们设计了两对引物利用PCR-SSCP结合直接测序法在病人及健康者中对MINK基因进行分析，结果发现第149位密码子产生A→G转换。在所研究的对象中，此变化在病人及正常对照者中均有存在。提示MINK基因的此突变性质为非病理性的多态突变。
关键词:人MINK基因;聚合酶链反应-单链构象多态性分析;长QT综合征
中图分类号:Q39
文献标识码:A
文章编号:0253-9772(1999)05-0014-16
The Study of hMINKGene by PCR-SSCP Analysis
YANG Ping DAI De-zai,
Rearch Division of Pharmacology,China Pharmaceutical University，Nanjing210009,China;
Martin Armstrong Walter Luyten
Janssen Research Foundation,B-2304 Beerse,Belgium
Abstract:Two novel mutations that have been described in human MINKgene are corresponding for Long QT Syndrome (LQTS). Two pairs of primers were designed to screen hMINKgene both in patients and in normal controls, We performed screening by PCR-SSCP analysis combining with direct sequencing. It showed a single A→G transition at position 149. This change was found in both patients and healthy subjects.
Key words:Human MINKgene;PCR-SSCP;Long QT syndrome(LQTS)J[78]
MINK基因编码一段长130个氨基酸的蛋白质，它与KvLQT1编码的蛋白共同构成心肌慢激活整流型钾电流IKs通道〔1～3〕。研究表明, MINK基因的突变可减弱IKs, 降低复极电流,延长动作电位从而产生长QT综合征(LQTS) 〔4, 5〕。LQTS是一类遗传性疾病。其特征是心室复极化的延长, 往往进一步发展成威胁生命的恶性心律失常，最终导致猝死的高发生率〔6〕。本研究利用PCR-SSCP结合DNA测序方法对MINK基因进行突变筛选，从而研究它与LQTS的关系。
1材料和方法
1.1病例选择及DNA制备
8例心电图均显示具有长QT特征的LQTS病人，健康对照者是来自比利时Janssen公司的志愿受试者。采集静脉血样，并采用QIAamp Blood Midi Kits提取全部基因组DNA。
1.2PCR-SSCP
PCR扩增反应仪器采用Perkin-Elmer 9700型热循环仪，Borhringe 公司PCR反应试剂盒。本文所合成的两对PCR引物的序列如下: MINK 1F: 5 -CTGCAGCAGTGGAACCTTAATG-3 ; MINK 1R: 5 -GTTCGAGTGCTCCAGCTTCTTG-3 ; MINK 2F: 5 -AGGGCATCATGCTGAGCTACAT-3 ; MINK 2R: 5 -TTTAGCCAGTGGTGGGGTTCA-3 。首先以1F/2R引物对扩增全部MINK基因，PCR反应体系含基因组DNA 0.2μg；上下游引物0.25μmol/L， DNTPs 2.5 mmol/L。TaqDNA聚合酶 1.25U。总反应体系50μl。PCR扩增条件：95℃10 分钟；95℃1分钟，58℃1分钟，72℃1分钟，循环30次，最后72℃延伸10分钟。经测序证实后纯化所得产物，纯化样品采用QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN公司); 然后分别利用MINK1F/1R,2F/2R二对引物以纯化后的[1] [2] 下一页
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