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青海藏族HLA II类基因多态性的研究 |
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，并结合-DQA1，-DQB1基因座，与我国其他民族群体及高加索人、尼格罗人的等位基因分布情况作精细比较，构建了隶属于三大人种11个民族或群体的分子系统树，探讨了藏族与其他民族之间的亲缘关系。
1材料和方法
1.1实验对象
为在青海居住3代以上，无血缘关系的健康藏族人，计49例。男女比例接近1∶1。
1.2基因组DNA的制备
用真空采血管(Nipora，日本产品)抽取静脉血5ml，依照Miller法抽提基因组DNA〔3〕。
1.3引物设计
HLA-DPB1基因的第二个外显子按照Ota等所推荐的引物DPB101N，DPB201进行扩增〔4〕，序列为:
DPB101N5 -GTGAAGCTTTCCCCGCAGAGAATTAC-3 ;
DPB2015 -CACCTGCAGTCACTCACCTCGGCGCTG-3 。
1.4PCR扩增DPB1目的基因
按照第11届国际组织相容性会议(1991)推荐的方法进行。变性、退火和延伸温度分别为94℃、62℃和72℃。在DNA扩增仪 (上海复日生物实验技术研制所) FR-800上扩增35个循环。对PCR产物以12%PAGE进行检测。
1.5RFLP分型
DPB1基因扩增产物分别用Bsp1286I、FokI(Biolabs，美国)、Dde1、BsaJI(Toyobo，日本)、BssHII、Cfr13I、RsaI (Toyobo，日本)、EcoN1和AvaII进行酶切。酶切产物以12%PAGE确定酶谱，并按H. Inoko 研究组的酶切格局确定样品的基因型〔4〕。
1.6统计分析
数据通过Origin软件处理后，用Halbau 软件计算P修正值（用Fisher s exact test校正），当Pcorr<0.05时表示具有显著性差异。
1.7系统树的构建
采用Nei 的公式，用自编C语言计算机程序计算藏族群体与其他各民族或群体间的遗传距离。并运用Nei 等（1993）的Mega软件中的算术平均的不加权对群法对各种族或群体进行聚类，绘制分子系统树〔5〕。
2结果和讨论
2.1藏族HLA-DPB1各等位基因的分布
为讨论方便，我们选取了藏族群体及几个有代表性的群体进行了统计比较，结果见表1。由表1可见，在检出的藏族DPB1的18个等位基因中，DPB1*0501(38.0%) 的频率最高，其次为*0201(20.0%)、*0301(16.0%)、*0402(16.0%)和*1301(16.0%)。未观察到的等位基因为*1601。经与其他民族或群体进行比较, 发现了有意义的结论：DPB1*0501在藏族、中国南方汉族、中国北方汉族和日本人中的分布频率最高，其等位基因频率分别为38.00%、?7.69%、60.20%和39.00%〔6～9〕；而在高加索人中，分布频率最高的均为*0401(此处以生活在北美的高加索人为例，其等位基因频率为52.0%)。尼格罗人中*0101（43.0%）的频率最高(以生活在巴西的尼格罗人为例)〔10, 11〕。因此可以认为：DPB1*0501在黄种人中分布最频繁，它可以作为黄种人的基因频率分布的特征之一；而*0401和*0101分别为高加索人和尼格罗人的特征高频等位基因。此外，通过计算Pcorr比较藏族与表1中几个群体的等位基因分布的差异性，发现*0501在黄种人中尽管皆为最高频率的等位基因，但其间*0501的分布频率仍有显著性差异（Pcorr<0.05），说明在同一人种内部等位基因的分布也是有差异的；其他等位基因的分布无显著性差异。从表1还可看出，有多个等位基因在藏族与高加索人及尼格罗人间存在显著的差异。
表1藏族DPB1等位的分布以及与其他群体的比较
DPB1 藏族 中国南方汉族 中国北方汉族 日本人 高加索 尼格罗人
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