|
石棉与烟雾溶液对人胚肺细胞DNA的损伤作用 |
| |
株并惠赠。用0.125%
胰蛋白酶+0.01% EDTA消化传代，用含10%小牛血清和双抗的MEM培养液于37℃，
5% CO2的条件下培养，3天传代1次。
2.石棉：采用国产茫崖温石棉，长度约为5～20 μm(>10 μm者占50%)，用
PBS配成不同浓度的混悬液，经超声分散和充分振荡混匀后备用。
3.香烟烟雾溶液的制备：将市售云南某卷烟厂生产的香烟(去掉过滤嘴)点燃，
将其另一头接到连有大气采样器的大包氏管上，管中盛有10 ml HEPES缓冲液
(pH=7.35)，用0.5 L/min的流量抽吸，每次抽吸1支烟，烟溶液的pH值为7.2，其
浓度为每毫升0.1支，将此溶液稀释后染毒。
4.实验分组：对照组，2.5、5.0、10.0 μg/ml温石棉组，0.312 5、0.625、
1.25×10-4支/ml烟溶液组，2.5 μg/ml温石棉+0.312 5×10-4支/ml烟溶液组，
2.5 μg/ml温石棉+0.625×10-4支/ml烟溶液组，5.0 μg/ml温石棉
+0.312 5×10-4支/ml烟溶液组，5.0 μg/ml温石棉+0.625×10-4支/ml烟溶液组，
10.0 μg/ml温石棉+50 mmol/L二甲基亚砜(DMSO)组，10.0 μg/ml温石棉
+100 U/ml过氧化氢酶(CAT)组，共13组，每组3个样本。
5.UDS测定：参照文献［１］的方法，加以改进，具体步骤为：将1×105 /ml
HEL细胞接种于24孔培养板中，每孔1 ml，在温度37℃、5% CO2的培养箱中培养
24小时，去除培养液，加入含1%小牛血清、5 mmol/L羟基脲的MEM培养液1 ml，
37℃、5% CO2继续培养24小时，每孔再加入185 kBq/ml的［3H］TdR和不同浓度
的温石棉和/或烟溶液，同时在10 μg/ml温石棉组中加入50 mmol/L的DMSO或
100 U/ml的CAT，继续培养24小时，然后吸出培养液，用PBS洗4次，用胰酶消化
后加入2 ml 10%的三氯乙酸，放置10分钟，将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，再将
滤纸烤干后放入液闪瓶中，加入5 ml闪烁液，用Beckman LS6500型液闪仪测定细
胞的放射性活度，用每分钟闪烁数(cpm)表示。
6.统计分析方法：用SPSS/PC+软件进行t检验和析因分析。
结果
1.温石棉对HEL细胞UDS的影响(附表)：随石棉浓度增高，细胞的3H标记的胸
腺嘧啶核苷［3H］-TdR参入量也随之增高，且有明显的剂量反应关系（r=0.989，
P=0.011)，其中5.0、10.0 μg/ml温石棉组细胞的cpm值明显高于对照组(P〈0.01)。
2.香烟烟雾溶液对HEL细胞UDS的影响(附表)：随烟溶液浓度增加，细胞的
cpm值也随之增加，且有明显的剂量反应关系(r=0.950，P〈0.05)，其中
0.312 5×10-4、0.625×10-4、1.25×10-4 支/ml烟溶液组细胞的cpm值均明显高于
对照组(P〈0.05，P〈0.01)。
3.温石棉与烟溶液联合作用对HEL细胞UDS的影响：2.5 μg/ml石棉与
0.312 5×10-4支/ml烟溶液联合作用，细胞的cpm值增加量为667.5，明显高于二者
单独作用时细胞cpm值增加量之和(271.5%)；2.5 μg/ml石棉与0.625×10-4支/ml
烟溶液联合作用，细胞的cpm值增加量为1 126.2，明显高于二者单独作用时细胞
cpm值增加量之和(518.8)；5.0 μg/ml石棉与0.625×10-4支/ml烟溶液联合作用，
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 砷对大鼠的致畸作用
下一个医学论文： 60例肥胖儿童血糖 胰岛素与高血压的关系
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文