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砷对大鼠的致畸作用 |
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ic oxide synthetase (iNOS) histochemical examinations. In vivo staining showed
that excessive apoptosis could be induced by arsenic. And, teratogenic mechanisms of arsenic
was analyzed in various ways. Conclusion Arsenic has certain teratogenic effects on rats in vivo.
【Key words】 Arsenic Teratogens
近年，我们曾用体外全胚胎培养模型探讨了砷、氟等多种环境污染物的发育
毒性和致畸机制［1，2］。但全胚胎培养忽略了母体对胚胎生长发育的影响。进一
步阐明母体-胚胎-细胞之间的相互关系、验证全胚胎培养的实验结果、揭示Nitric
Oxide(NO)是否与畸胎发生有关等极为必要，本研究就是在这一背景下进行的。
材料与方法
1.试剂和仪器：As2O3(日本产)；NADPH(Sigma)；Ringer s液和Hanks液；三羟
甲基氨基甲烷；Nile blue sulfate(NBS)；Triton X-100；硝基四氮唑蓝等多种分析纯生
化试剂。主要仪器有520型扫描电镜；光学显微镜；遥控恒冷箱切片机和超净工作
台等。
2.实验动物和分组：SD雌鼠体重230～280 g，查见阴栓之日定为妊娠0天。随
机分为4组，1个对照组及3个染毒组，As2O3剂量依次为0、1、4和10 mg/kg，每组
20只孕鼠。染毒均在孕9.5天时一次性腹腔注射。
3.致畸性检测：于妊娠19.5天脱颈椎处死孕鼠，按常规方法检测胎鼠有无畸
形。
4.器官形成期胚胎的检测：于妊娠11.5天处死孕鼠，剖腹，解剖镜下剥离蜕
膜和Reichert s膜及卵黄囊，按已建立的方法镜检胚胎并记分［3］。部分胚
胎用Bouin液、多聚甲醛-冷冻保护液和戊二醛固定，以便进行病理和扫描电镜观
察。
5.诱生型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的表达：切片
(8 μm)经再固定和Tris-HCl漂洗后入反应液孵育，脱水后固定。根据胚胎细胞
iNOS的表达程度分为四级(0、±、+和++)。
6.NBS活体染色法：将胎龄14.5天的胚胎按照Rogers等［4］介绍的方法，直接
投入用Ringer液稀释NBS的反应液中，37℃孵育后光镜下观察。
结果
1.As2O3对母鼠和胎鼠的影响：各剂量组均未见母鼠有明显的中毒症状和死亡。
孕鼠的增重仅10 mg/kg组明显低于对照组。不同浓度As2O3对胎鼠生长发育的影响
见表1。4组的吸收胎及死胎发生率依次为10.2%、17.4%、24.8%和61.1%。骨骼畸形
率(包括枕骨和胸骨缺损，少肋、波状肋和分叉肋，掌趾骨数及尾椎骨缺失等)分别
为1.89%、3.12%、17.28%和78.57%，4 mg/kg和10 mg/kg两组与对照组之间差异存
在显著性。
表1 As2O3对胎鼠生长发育的影响(±s)
剂量
(mg/kg) 总着床数
(个) 胎鼠数
(个)
体重
(g)
身长
(cm)
尾长
(cm)
0 118 106
3.56±0.47 3.41±0.32 1.38±0.11
1 116 96 3.58±0.39 3.40±0.22 1.37±0.14
4 109 81 3.30±0.40 3.21±0.3上一页 [1] [2] [3] 下一页
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