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荧光法测定血清脂质过氧化物的最佳反应条件 |
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定血清脂质过氧化物的水解酸度。第二平台(pH 1.0～3.0)情况下，荧光强度与反
应酸度，与反应时间的关系：由于标准的荧光强度与酸度关系的平台是［H+］=
1 mol/L～pH 2.0，因此作者配制pH 1.0～2.0缓冲溶液系列，以寻找标本的荧光强度
和酸度，和反应时间的平台，结果见表3。由表3可知，标本加入或不加入抗氧剂，
在pH 1.4～1.8范
表2 荧光强度与反应时间的关系
20min 30min 60min 75min 90min 120min 150min
MDA标准* 50.2 54.6 54.5 55.2 53.5 54.1 50.0
血清** 14.6 24.5 39.1 57.8 68.8 93.7 105
* 浓度为6 μmol/L，**分析前加入抗氧剂Na2-EDTA和GSH(最后浓度分别为
1.5 mmol/L和0.6 mmol/L)
表3 荧光强度和反应时间与溶液酸度关系
反应时间
(min) pH值
1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0
血清* 20 8.7
8.2
6.5
7.0
6.5
30 10.0 9.4 8.7 7.6 7.4
45 12.4 10.2 9.8 10.0 9.6
60 13.2 12.4 10.0 10.0 9.8
血清** 60 12.6 10.8 10.0 9.8 9.3 7.8
MDA标准 60 52.1 54.0 53.2 54.5 52.8 52.4
*加入抗氧剂，**不加入抗氧剂(另一血清样)
围内，荧光强度均有较好的平台，且在此酸度范围内，荧光强度在反应45分钟后
达平台。很少有作者注意标准和标本与TBA反应的酸度关系问题。Wojciech等［2］
考察了标本与TBA反应的酸度问题，发现在pH 1.5～pH 1.8范围内荧光强度达平台，
但仍采用Bird等［5］选用的反应酸度(pH 2.4～pH 2.6)，因此加标回收率偏低
(82%～87%)，他提出萃取前酸度调节至pH 1.6～pH 1.7，以改善回收率(94%～101%)。
本文采用pH 1.50缓冲溶液(反应液pH 1.60)为反应和萃取酸度，获得了很好的回
收率(平均为98%)，好于国内外大多数文献报道的结果。不少文献选用pH＜1.0的
反应酸度，且采用的酸度不同。由于不能控制标本在反应过程中的自动氧化问题，
故报道的健康成人血清MDA水平偏高且各不一致(表4)。在本实验条件下，标准和
标本的TBA反应物吸收光谱在波长525 nm～550 nm范围内相一致(但标本中还存在
其他弱干扰性吸收，使分光光度法测定结果偏高)。标准和标本的荧光光谱在整个
波长范围内相一致。因此在本实验条件下，荧光法测血清脂质过氧化物有良好的
选择性。对59例健康成人测定的血清MDA水平与Knight等［3］用HPLC法测定的参考
值十分一致(表4)。
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