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大鼠脑缺血区非特异性酯酶阳性细胞的分布和定量研究 |
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又有小胶质细胞的激活和增生［5］。但是，有关脑缺血区非特异性酯酶阳性细胞的形态、分布和数量变化的详尽研究报道，所见甚少。本实验的目的旨在补充这方面的资料。
材料和方法
1.实验动物及分组
选用雄性SD大鼠40只，3～4月龄，体重200～250g，由西安医科大学实验动物中心提供。分为对照组及缺血1h再灌流0h、2h、4h、8h和16h共6组(n=6)。4只用于TTC和Evans蓝染色实验，以证实脑缺血模型的可靠性。
2.缺血模型制做及制片
脑局部缺血／再灌流模型按照Barone等［6］方法，其中有些步骤进行了修改。主要步骤为：用20%乌拉坦(urethan)(0.6ml/100g鼠重)对实验大鼠腹腔注射麻醉，从颞区入颅，暴露右侧大脑中动脉主干，用无创伤缝合线在嗅静脉上方悬吊大脑中动脉主干，使其距脑表面约1～2mm，悬吊1h，抽出缝线，开始上述不同时间的再灌流，依次缝合颞肌和皮肤。
大鼠脑缺血／再灌流之后，在麻醉下开胸，用生理盐水200ml从左心室冲洗、用4%多聚甲醛(0.1mol／L PBS配制，pH 7.4)400ml灌流固定和开颅取脑。脑缺血中央区冷冻切片，片厚16μm，贴在载片上，作酶组织化学染色。
3.酶组织化学染色和定量
切片于室温晾干后入固定液(Na2HPO4 20mg, KH2PO4 100mg,30%福尔马林25ml,100%丙酮45ml)室温30min,0.1mol/L PBS(pH7.6)洗3次。入反应液［0.2mol／L PBS(pH7.6)6ml，三蒸水24ml，作用液0.6ml(α-醋酸萘酯1g,100%丙酮50ml，三蒸水50ml)，快蓝B盐30mg］于室温30min,0.1mol/L PBS洗3次。常规脱水、透明和封片。阴性对照片在反应液中免去快蓝B盐。
每个样本取6张切片(隔5取1)进行染色。光镜观察，在相同的光强度和放大倍数下，用C6型网格目镜尺在每一张切片的缺血区随机取6个视野，对阳性细胞进行计数，数据以±s表示，SAS软件统计处理，Q检验判断结果。
结 果
光镜观察显示，正常对照组有少数非特异性酯酶阳性细胞，呈蓝黑色，沿血管的走行分布，主要位于小血管和微血管壁内及其周围(图1)。脑实质内可见少数阳性细胞散在分布。在实验组，阳性细胞呈圆形或卵圆形，没有明显的突起(图2，3)，主要分布于脑缺血边缘区。损伤侧基底节区比皮质缺血区明显增多。计数统计结果显示，在缺血1h再灌流2h后，皮质缺血区阳性细胞明显增多，与对照组相比差异明显(P<0.05)(附表，图2)，随再灌流时间延长逐渐增加，在脑缺血1h再灌流16h后达到最高峰，与其他实验组相比有显著性差异(P<0.01)(附表，图3)。在损伤侧基底节区，在脑缺血1h阳性细胞即增加(附表，图4)，并随再灌流时间延长而增加。在脑缺血1h再灌流2、4、8h，基底节区非特异性酯酶阳性细胞比皮质缺血区显著增多(附表，图5，6)。
附表 皮质缺血区和损伤侧基底节区非特异性酯酶阳性细胞的计数和比较
Table The number and comparison of nonspecific estarase positive cells in the ischemic cortex and basal ganglia n=6
检测区域
measure area 对照组
control Ⅰ1h／R0h组
Ⅰ 1h／R0h Ⅰ1h／R2h组
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