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集落刺激因子 |
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王亚奇 刘宗惠 于雪 崔月汉
【摘要】 目的 对体外培养神经元是否具有表达、合成集落刺激因子受体(CSF-1R或c-fms)的能力进行观察。 方法 在用免疫双标记的方法确定培养细胞确系神经元的基础上，采用原位杂交组织化学和免疫组织化学的方法，在mRNA和蛋白质两个水平检查神经元是否拥有集落刺激因子受体。 结果 神经元具有表达并合成CSF-1受体(c-fms)的能力。 结论 CSF-1对神经元的保护作用至少部分是通过其对神经元的直接影响实现的。
【关键词】 集落刺激因子受体 原位杂交 免疫组织化学 小鼠
EXPRESSION OF CSF-1 RECEPTOR(c-fms） ON CORTICAL
NEURON OF MICE IN VITRO
Wang YaqiΔ, Liu Zonghui, Yu Xue, Cui Yuehan
(Department of Neurosurgery Navy General Hospital, Beijing)
【Abstract】 Objective To investigate the existence of CSF-1 receptor(c-fms) on neuron. Methods The culturing neurons were identified by double immunofluorescent stainings of neuron specific enolase (NSE) and c-fms. The expression and production of c-fms on neuron were examined by in situ hybridization histochemical technique and immunocytochemical methods respectively.Results Neuron could express and produce CSF-1 receptor.Conclusion CSF-1, in addition to its effect on microglia, may affect neurons directly by potentiating neurons survival.
【Key words】 CSF-1 receptor; Immunocytochemistry; in situ; Hybridization histochemistry;Mouse
体内、外实验均已证明，集落刺激因子-1(CSF-1)对神经元具有保护作用，尤其是在神经元受损时［1～3］。有些学者认为，CSF-1通过刺激脑内小胶质细胞，由后者在释放炎症因子的同时释放神经营养因子而起到神经元保护作用的，其主要依据是，小胶质细胞是脑内CSF-1受体的拥有者［4］。研究表明，小胶质细胞受适当刺激后，可释放某些营养因子［5］同时也释放大量炎症因子和毒性因子，如小胶质细胞反应过度所释放的大量的白介素-1(IL-1)，其自身及所引发的炎症反应均可导致神经元的严重损伤。鉴于小胶质对神经元影响的复杂性，本研究拟应用原位杂交和免疫组织化学等方法，对神经元能否表达并合成CSF-1受体、即能否接受该因子的直接作用进行了观察，以期解释该因子对神经元保护作用机制。
材料和方法
1.抗体
本实验选用了3种不同的抗CSF-1受体(c-fms)抗体：(1)抗c-fms整体分子抗体(Cambridge Research Biochemicals,England)。(2)选择性抗c-fms分子膜外段抗体(Upstate Biotechnology INC, N. Y.)。(3)选择性抗c-fms分子膜内段抗体(Upstate Biotechnology INC,N.Y.)。
2.探针制备
用DNA合成仪合成含有48个核苷酸的寡聚核苷酸探针(VCDNA services Calgary Canada)，该探针选择性的互补于鼠CSF-1受体(c-fms)mRNA 904～951碱基序列(膜外段)［6］。用地高辛探针标记试剂盒(Boehringer Mannheim)作末端标记。
3. 细胞培养
按照文献［3］取小鼠脑皮层组织作神经元培养。将细胞接种于直径60mm的组织培养盘中。每盘中含6张poly-L[1] [2] 下一页
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