|
大鼠臂旁核向丘脑腹后内侧核的投射 |
| |
on transmission, but also closely related to somatic sensory information transmission.PBN might also play an important role in the regulation of somatic sensory information.
【Key words】 Parabrachial nuclei; Thalamic ventral posteromedial nucleus; Somatic sensation; Visceral sensation; Rat
臂旁核(PBN)由围绕在小脑上脚周围的神经元构成，可分成臂旁外侧核(PBL)、臂旁内侧核(PBM)和KF核3个部分［1］。PBN的功能非常复杂，主要与呼吸调节［2］、心血管活动［3］和味觉［4］等内脏活动和感觉信息的传导有关。PBN具有广泛的纤维联系，Saper［5］在最近的一篇综述中对其进行了系统总结，指出PBN向丘脑发出投射的神经元仅位于PBL的内外侧亚核(internal lateral subnucleus,IL),且IL也仅向丘脑板内核群投射。丘脑内接受躯体感觉信息(包括伤害性信息)的特异性核团主要是丘脑腹后内侧核(VPM)和丘脑腹后外侧核(VPL)，此二核合称丘脑腹基底复合体(VBC)。三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)和脊髓背角浅层是躯体伤害性刺激信息传递的初级门户。近年的研究证实PBN也是Vc和脊髓背角浅层上行投射神经元的重要中继站，在躯体伤害性刺激信息向高级中枢传递过程中发挥重要作用［5～9］。由于观察PBN是否向VPM投射对深入阐明面口部伤害性刺激信息的传递和调控有重要的意义，故本研究用四甲基罗达明(TMR)或辣根过氧化物酶(HRP)逆行标记和生物素葡聚糖胺(BDA)顺行追踪技术，对PBN向VPM的上行投射及其终止部位进行了观察。
材料和方法
SD大鼠24只，体重200～250g,雌雄不拘，分为3组，每组8只。第1、2组动物经戊巴比妥钠腹腔麻醉(40 mg/kg)后开颅，将0.1μl的10%TMR(第1组)或0.05～0.1μl的30%HRP(第2组)分别定向注入右侧VPM。注射坐标为(mm)：冠矢点后3.7～3.8，旁开2.4～2.5，进针深度6.3～6.4。注射用尖端粘外径为50～80μm微玻管的1μl Hamilton微量注射器，注射时间为15～20min,注毕留针15min。动物存活4d后用过量戊巴比妥钠深麻，开胸，经心脏插管至升主动脉。先用0.9%盐水100ml冲净血液，再分别用含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PB，pH7.4)500ml(第1组)或含1%多聚甲醛和1.25%戊二醛的0.1mol/L PB 500ml(第2组)灌注固定。注毕立即取脑，后固定4～6h，再移入30%蔗糖中至沉底(4℃)。将注射部位和脑桥吻段冠状冻切，片厚30μm，隔3张取1张，分4套收集于0.01 mol/LPBS中(pH7.3)。将第1组动物的第1套切片裱于载片上，在荧光显微镜下观察注射区和PBN内的TMR逆标情况。选择注射区位于VPM内且PBN内有逆标神经元的动物的第2套切片，用ABC法进行TMR免疫组织化学染色：(1)切片入豚鼠IgG抗TMR血清(1∶1 000，日本京都大学医学部金子武嗣先生惠赠)中孵育18～24h；(2)Biotin标记的驴抗豚鼠IgG血清(1∶200,Jackson)中孵育3h；(3)ABC混合液(1∶50,Vector)中孵育1h。孵育均在室温进行。抗体和复合物的稀释均用含0.3%的Triton X-100和5%正常马血清的PBS。PBS彻底清洗切片后，用二氨基联苯胺(DAB)、硫酸镍胺和H2O2呈色。裱片，中性红复染，脱水、透明、封片、光镜观察。将第1组动物的第3套切片丢弃。第2组动物的第1套切片经洗涤液(0.1mol/L PB,pH7.0)漂洗后，用硝普钠作稳定剂的TMB法呈色，其余处理同第1组。
第3组动物麻醉后，用尖端粘微玻管的微量注射器将0.1μl的10%BDA水溶液缓慢注入左侧PBN。动物存活3d后深麻、开胸，先用0.9%的盐水冲净血液，再用500ml含4%多聚甲醛和0.05%戊二醛的PB灌注固定。注毕立即取脑，后固定3～6h；再移入30%蔗糖至沉底(4℃)。在脑桥右侧做标记，将PBN注射区及丘脑冠状冻切，片厚30μm，隔3张取1张，分4套收集于PBS中。先用PBS清洗第1套切片，再将切片置入含0.3%的Triton X-100和5%正常羊血清的P上一页 [1] [2] [3] 下一页
上一个医学论文： 白细胞介素6受体样免疫反应性细胞在大鼠脑内的分布
下一个医学论文： 鸣禽发声控制核团古纹状体粗核壳区的投射研究
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文