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白细胞介素6受体样免疫反应性细胞在大鼠脑内的分布 |
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are widely expressed in the brain of rats,which indicates the potential neurobiological role of IL-6 receptor in the crosstalk of immune and neuroendocrinology.
【Key words】 Interleukin-6 receptor;gp130;Brain;Immunohistochemistry;Rat
白细胞介素6(IL-6)是一种在免疫应答、免疫细胞生长分化和造血中起重要作用的多功能细胞因子，IL-6还能促进神经元生长、减少摄食、诱导发热，并激活下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)［1］，IL-6的多重作用依赖于膜受体。目前已知，IL-6受体至少由两个亚单位即IL-6结合受体蛋白(IL-6R)和信号转导蛋白gp130所组成。IL-6与特异的IL-6R结合后，促进膜上两个gp130分子发生酪氨酸磷酸化，引起丝氨酸/苏氨酸激酶激活，从而促进相应基因的活化。gp130除组成IL-6高亲和力受体外，也是白血病抑制因子(LIF)，抑瘤素(oncostatin)等受体所共用的亚单位［2］。文献报道用35S标记的探针进行原位杂交［1、3］，或用反转录PCR(RT-PCR)方法［4］在大鼠脑中可检测出IL-6R和gp130mRNA，但对其编码的IL-6受体蛋白在脑内的分布尚未见报道。在原位杂交结果中银颗粒对细胞和核团的定位不太准确且背景较深，而RT-PCR方法只能检测出组织中含有IL-6受体mRNA，但不能进行定位。本研究采用免疫组织化学方法，观察了IL-6R和gp130在正常大鼠脑内的分布，为进一步研究IL-6在大鼠中枢神经系统的作用提供形态学依据。
材料和方法
抗IL-6R和抗gp130多克隆抗体均购自美国Santa Cruz Biotechnology公司。抗IL-6R抗体针对小鼠IL-6R C末端441～460氨基酸片段，抗gp130抗体针对小鼠gp130 C末端的895～914氨基酸片段。DAB、ABC试剂盒及葡萄糖氧化酶均为美国Sigma公司产品。雄性SD大鼠(150～200g)购自本校动物中心，饮食不限。
用戊巴比妥钠腹腔麻醉大鼠(50mg/kg),经升主动脉依次灌注生理盐水80ml(室温)，4%多聚甲醛(0.2mol/L PB配制，pH7.4，4℃)400～500ml后，取脑，置入同种固定液后固定4h，然后浸入含30%蔗糖的0.01mol/L PBS溶液中，待脑组织下沉后，行冠状冰冻切片(厚30μm)。每5张切片取1张，置入抗IL-6R或gp130的兔血清中，抗体工作浓度均为1∶500，室温(约30℃)孵育15～20h，然后行ABC法免疫组织化学染色，用葡萄糖氧化酶-硫酸镍铵-DAB增强法呈色。依次将脑切片贴于涂布有明胶铬明矾的载玻片上，脱水、透明、中性树胶封片，镜检观察。
对照实验：用PBS及正常羊血清替代一抗进行免疫染色，其余步骤同实验组。
结 果
IL-6R阳性细胞胞体较小而圆，呈胞浆着色，阳性物质几乎覆盖细胞核。gp130阳性细胞为卵圆形，胞体较大，有的细胞有细长突起。gp130阳性细胞亦为胞浆着色，胞核未着色。两种受体在大鼠脑内均有广泛的分布。
1.皮层
IL-6R阳性细胞分布于大脑皮层的外颗粒层、内颗粒层及内锥体细胞层(图1)，在扣带回皮层尤其明显。gp130在皮层染色较弱，主要分布于外锥体层，阳性细胞为典型的锥体细胞，有较长的突起伸向皮层(图5)。
2.下丘脑
IL-6R阳性细胞广泛分布于下丘脑的室旁核、腹内侧核(图2)、视上核(图3)、嗅结节，阳性细胞多呈梭形、多角形或不规则形，染色较深，细胞密集。gp130阳性细胞主要分布于下丘脑室周核(图6)、室旁核的内侧小细胞区(图7)、腹内侧核、视上核(图8)、弓状核、杏仁核。室周核和弓状核的阳性细胞染色较深，其细胞突起相互交织成网状，室管膜也呈阳性反应。室旁核内侧小细胞也为gp130阳性反应，胞体较小，呈梭形排列，染色也较深。在视上核的gp130阳性细胞分布较密集，胞体小而圆。在杏仁核的阳性细胞染色较弱。
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