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人巨细胞病毒单克隆抗体识别的抗原表位的筛选 |
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杨淑静 卜凤荣 王全立 杨子义
【摘要】 目的 找出人巨细胞病毒(HCMV)单克隆抗体识别的抗原表位以进行HCMV多肽疫苗的研制。方法 通过链亲和素-生物素的作用将HCMV单抗固定在酶联板上，加入噬菌体随机六肽文库，经过三轮捕捉、洗脱、扩大培养的筛选过程，并逐轮增加冲洗强度，与HCMV McAb具有亲合力的噬菌体得到了富集；从最后得到的三级库中，随机挑选16个单克隆，测定其所携带的外源DNA的序列，找出一致序列并进行同源性查询。结果 16个克隆中有15个序列相同，5 -AGT GCT GGT TGG GCT TCT-3 ， 对应的氨基酸序列为Ser-Ala-Gly-Trp-Ala-Ser，此序列同源性查询结果显示与HCMV病毒膜糖蛋白UL01有78.8%的同源性，其中有4个氨基酸残基(AGWA)是完全相符的。结论 所筛选到的六肽序列可能为HCMV抗原表位，从而说明用噬菌体肽库技术寻找抗原表位的可行性。
【主题词】 巨噬细胞病毒，人 噬菌体 抗体，单克隆 抗原，病毒
Screening phage displayed random hexapeptide library against HCMV McAb Yang Shujing, Bu Fengrong,Wang Quanli,et al. The Institute of Radiation Medicine,Beijing 100850
【Abstract】 Objectives To define the epitopes of HCMV with McAb aiming at preparing peptide vaccine in future. Methods (a) Affinity purification of monoclonal antibody; (b)Screening against a phage-displayed random peptide library using the purified antibody ;(c)Plating the enriched phage on agar plates, randomly picking clones;(d)DNA sequencing and conducting a homology search against the protein sequence databank. Results A consensus DNA sequence has been found, 5 -AGTGCTGGTTGGGCTTCT-3 , the amino acid sequence was Ser-Ala-Gly-Trp-Ala-Ser, which had the highest match (78.8%) with a fragment of HCMV UL01 protein. Conclusions Screening of bioactive peptides from random peptide libraries using monoclonal antibodies as ligands is an effective method to define the epitopes of protein antigens; the sequence that we found might be the epitope of HCMV.
【Subject words】 Cytomegalovirues, human Phage Antibody, monoclonal Antigen, viral
HCMV是引起新生儿和免疫低下病人发病和死亡的主要病原体之一,由于其感染的普遍性和严重性，已引起医学界的高度重视，目前尚无特效药治疗。HCMV疫苗研制工作国外始于20年前，但离实际应用还有很大距离。本实验用抗HCMV的McAb筛选噬菌体随机六肽文库，以期找出HCMV的抗原表位作为候选多肽疫苗。表面呈现技术是一种新的基因技术〔1〕，它使表达的外源肽或蛋白质的结构域以融合蛋白的形式展现在噬菌体的表面，被展示的多肽或蛋白质可以保持相对独立的空间结构和生物活性，借以研究多肽(蛋白质)的性质、相互识别和作用，并据此从巨大的展示库中选择出特定功能的多肽结构。1990年G.P.Smith等人将一段人工合成的寡核苷酸插入到丝状噬菌体糖蛋白Ⅲ的N末端，构建了随机六肽表位文库，本研究所用的六肽库就源自此库。这项技术的优点是外源多肽与其基因关联，筛到多肽[1] [2] 下一页
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