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白细胞移动抑制因子 LMIF 释放的测定及条件性抑制LMIF的作用 |
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red with control group) and in nonconditioned group (P<0.05 as compared with control group), but there was no significant difference between the conditioned group and the nonconditioned group. Conclusions An improved assay of LMIF has been developed and that a model of conditioned LMIF response in vitro has been established. This model could be used for the analysis about the mechanism of the conditioned serum.
【Subject words】 Leukocyte migration inhibitory factor Conditioned immune response 2,4-Dinitrochlorobenzene
条件性免疫应答的研究是近10多年来在神经免疫学研究领域中的一个研究热点〔1〕。目前已经证明，各种免疫反应包括免疫抑制〔2〕、免疫加强〔3〕、移植免疫〔4〕、肿瘤免疫等〔5〕都能建立条件性反应。我们以前的工作表明，以环磷酰胺作为非条件刺激，能够明显抑制以2,4-二硝基氯苯(DNCB)涂抹腹部皮肤致敏动物并第二次一侧耳部皮肤涂抹DNCB所引起的耳廓肿胀（迟发过敏反应）。在此基础上，以樟脑芳香气味为条件刺激，与非条件刺激(环磷酰胺)结合强化后，单纯给樟脑气味即可引起迟发过敏反应的抑制，从而建立了稳定的条件性抑制迟发过敏反应的模型〔6〕。我们的工作还发现，如果将形成条件性免疫抑制反应的小鼠的血清注入正常小鼠体内，后者的迟发过敏反应也受到抑制，说明条件性反应小鼠的血清中存在某种物质。初步分析表明，该物质的分子量小于10 000〔6〕。本实验选用了与迟发过敏反应密切相关的白细胞移动抑制因子(LMIF)的测定为指标，建立了体外环磷酰胺条件性免疫抑制反应的动物模型，从而为进一步分析血清中的抑制物创造了有利的条件。
材料与方法
1. 实验动物：雄性LACA小鼠，体重18～24g；Wistar大鼠，体重250g，雌雄不限，由北京医科大学实验动物中心提供。
2. 溶液配制：以下三种溶液的配制方法分别为：(1) 环磷酰胺溶液：以无菌生理盐水配制，溶液的浓度为75mg/ml，置4℃保存备用。(2) 2,4-二硝基氯苯(DNCB)溶液：称取DNCB 200mg，溶于丙酮与橄榄油混合液(3∶3)中(33mg/ml)，封好瓶口，-20℃保存备用。(3) phytohemagglutinin(PHA)溶液：称取PHA 100mg，溶于10ml不完全RPMI 1640培养液中，过滤除菌，-20℃保存备用。
3. 樟脑气味(条件刺激)的制备：将固体樟脑精15g放入装有40ml液体石蜡的烧杯中，加热至有烟雾和气味溢出，置此烧杯于实验组鼠笼内并保持较密闭状态，每15～20分钟取出烧杯加热一次以保持空气中一定的樟脑浓度。
4. 环磷酰胺条件性免疫抑制反应动物模型的建立：将LACA小鼠随机分为6组，每组7只。条件反应组的处理过程是：从第0天开始给予条件刺激(樟脑)1小时之后，立即腹腔注射环磷酰胺(75mg/kg)作为非条件刺激。第1天重复此程序后，用DNCB涂腹致敏，第6天仅嗅樟脑气味不再注射环磷酰胺并用DNCB涂左耳。第7天处死动物，取其肠系膜淋巴结，制备LMIF。其它5组的处理程序见附表。
附表 条件性抑制小鼠LMIF的处理程序
Table. Treatment schedule for the conditioned suppression on the leukocyte migration inhibitory factor(LMIF) in mice
Treatment d0 d1 d6 d7
GAM Air CY NS GAM Air CY NS S GAM Air CY NS C LMIF preparation
NOR(on PHA) + + + + + + + + +
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