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抗氧化剂抑制内皮细胞的白细胞粘附不依赖它们的抗氧化特性 |
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effect. In contrast, PDTC and chrysin inhibited the adhesion of HL60 cells. DCI and probucol did not have influence on the adhesion within the area of the examined shear stresses. Only PDTC inhibited the TNFα-induced activation of NF-κB in endothelial cells. CONCLUSION： The inhibition of endothelial leukocyte adhesion by antioxidative substances is not to be explained by its antioxidative characteristics only. The inhibitory effect of PDTC on NF-κB activation was probably not related to its antioxidative properties.
MeSH Endothelium; Cells; Antioxidants, NF-kappa-B
一般认为，氧自由基是炎症反应，动脉粥样硬化和再灌注损伤的致病因素。这些病变的早期共同特征是细胞粘附分子介导的内皮细胞-白细胞粘附增加。细胞粘附分子的基因表达主要由核转录因子NF-κB控制。近来发现许多抗氧化剂，如吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)等，能有效地抑制NF-κB的激活［2，3］。因此有人推测氧自由基与NF-κB的激活有关［4］。特异性地抑制NF-κB的活性能够抑制细胞粘附分子的表达，也许是防治动脉粥样硬化的潜在手段。然而，迄今尚未阐明现已广泛使用的抗氧化剂是否抑制NF-κB的活性或/和能否清除氧自由基；也不清楚抗氧化剂如何影响NF-κB的活性，和细胞表面粘附分子表达。
本研究用抗氧化剂PDTC，DCI(3，4-dichloroisocoumarin，二氯异香豆素), chrysin(柯因)及临床广泛使用的抗动脉硬化药probucol进行实验，旨在探讨抗氧化剂调节NF-κB的活性是否通过一种对氧化还原敏感的机制，及抗氧化剂能否抑制内皮细胞表面的粘附分子表达和内皮细胞的白细胞粘附。
材料与方法
一、细胞培养：
(一)人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)：HUVEC按常规方法分离自新生儿脐带静脉［5］，培养在内皮细胞培养液(M199培养液加入20%小牛血清，2 mmol/L L-谷氨酸，100 mg/L链霉素，100×103 U/L青霉素，10 μg/L内皮细胞生长因子)，保持在37℃，5% CO2培养箱中。
(二)HL60细胞：HL60细胞是一种表面有路易斯寡糖(sialylated Lewis x, sLeX)高水平表达的细胞系，sLeX是内皮细胞选择素(E-selectin)的配体。细胞培养在含10%小牛血清、抗生素、2 mmol/L L-谷氨酸的RPMI 1640培养液，保持在37℃，5% CO2培养箱中。
二、细胞粘附实验：
为了评价抗氧化剂对白细胞-内皮细胞粘附的影响，我们在一种液体流动小室(flow chamber)中进行细胞粘附实验。液体流动小室是一种平行板状结构，其管道由入口至出口呈双曲线状增宽，在恒流条件下管壁切变力是管道宽度的函数，提供一种接近生理的液体流动条件。液体流动小室安放在Zeiss显微镜上，与灌注系统相连，流速由输液泵控制。整个系统在实验过程中保持37℃。
将传了两代的HUVEC种在经过纤维连接素处理的载玻片上培养至完全融合。加抗氧化剂PDTC，DCI，chrysin和probucol(浓度从3×10-4到10-7 mol/L)孵育15 min后，用肿瘤坏死因子(TNFα)刺激4 h。将种有HUVEC的载玻片安放在流体小室内，从小室入口加入100μL HL60细胞(109/mL)，任其产生粘附，5 min后计数固定粘附在内皮细胞上的白细胞个数。实验过程始终用加有0.1%牛血清蛋白、10 m上一页 [1] [2] [3] 下一页
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