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大鼠全身辐射损伤后小肠吸收功能变化的研究 |
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porting-ATPase; Rats
目前，放疗和化疗仍然是肿瘤治疗的主要手段。由于肠道尤其是小肠是电离辐射的敏感组织，放疗病人常出现消化道的损伤，发生结构和功能的变化，而这种变化常是放疗过程的一个限制因素［1］。以往，有关电离辐射后小肠对氨基酸吸收的影响及其机制的研究较少，方法也多为离体实验，本实验用在体法对60 Co γ线全身一次照射大鼠小肠吸收L-酷氨酸(Tyr)的变化规律进行了研究，并对其机制作初步探讨。
材料与方法
一、动物准备：
雌性Wistar大鼠122只，体重150～250 g，60Co γ线全身一次照射。根据照射剂量的不同，将大鼠分为0 Gy组(正常对照组)、1.5 Gy组、3.0 Gy组、4.5 Gy组、6.0 Gy组、7.5 Gy组、9.0 Gy组和12 Gy组，剂量率为2.95～3.48 Gy/min。根据6.0 Gy照射后时间不同，将大鼠分为照后1 d组、3 d组、5 d组、7 d组、15 d组、25 d组和30 d组。除0 Gy组和12 Gy组大鼠分别为12只和6只外，其它实验组大鼠为8只。实验前禁食12～16 h。
二、试剂：
［3 H］标记酪氨酸(tyrosine, Tyr)购自上海原子能研究所，比度为170.2×1010 Bq/mmol，浓度为3.7×107 Bq/mL，Na+-K+-ATPase和哇巴因均为Sigma公司产品。
三、用在体门静脉取血法［2］测定小肠Tyr的吸收量：
在Oddis括约肌下方结扎十二指肠，并作门静脉插管。肝素全身抗凝后，在30 s内将含4 mmol/L ［3 H］标记Tyr的生理盐水在结扎处下方注入十二指肠，分别在给Tyr后1 min、2.5 min、5 min、7.5 min、10 min、15 min、20 min和30min取门静脉血，每时点大鼠6只。用滤纸片法在KLB-1215型液体闪烁仪上测定血浆的放射性。
四、小肠上皮细胞计数：
取1小段空肠，称重，置于含0.6 mL 15%冰醋酸的匀浆器中，研磨后稀释，6 h后用血细胞计数板在高倍镜下计数4个大方格，换算成每毫克肠重小肠上皮细胞数。
五、Na+-K+-ATPase活性测定：
用Murray法［3］测定小肠粘膜的Na+-K+-ATPase活性，蛋白质含量测定用Bradford法［4］。
六、Na+跨膜转运：
以加入20%葡萄糖后膜电位(potential difference, PD)和短路电流(short circuit current, Iscc)的增加幅度来判断Na+的跨膜转运［5］。
七、统计学处理：实验数据以表示,用分组资料t检验测试差异显著性。
结果
一、6 Gy照射后不同时间以及不同剂量照射后第3 d，大鼠小肠吸收Tyr量的变化：
表1为6 Gy照射后不同时间小肠对Tyr吸收曲线的峰值(最大吸收量)和峰时(达到最大吸收量的时间)的变化。6 Gy照射后第3 d，吸收峰值明显低于正常对照组(P＜0.05),吸收峰时明显偏后(P＜0.05)。从图1看出，3 Gy组各时点吸收量与正常对照组相比无明显差异；6 Gy照射后第3 d，吸收峰值明显低于正常对照组(P＜0.01)，峰时明显偏后(P＜0.05)，1.5 min～7.5 min时点均低于对照组(P＜0.05); 9 Gy组和12 Gy组，则不出现明显峰值，其1.5 min～10 min时点均低于对照组(P＜0.01)和6 Gy组(P＜0.05)。
表1 6 Gy照射后不同时间Tyr吸收曲线的峰值和峰时
Tab 1 The time to peak and peak value of tyrosine absorption curve
on various days after 6 Gy γ-irradiation (,n=6)
Days after
exposure
Time to peak
(min) Peak value
counts.min-1 %
Normal 2.19±0.52 4 327±788 100.00
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