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MJD基因CAG不稳定性扩增与临床研究 |
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matental s. Cerebellar ataxia was most severe, the next were dysarthria and bulging eyes. Amytrophy was seen only in bed ridden patients. Cerebellar atrophy was more severe than brain stem, cord atrophy was n t observed in all MJD.
Key words: MJD;Gene mutation;Clinical electrophysiology
Machado-Joseph病(MJD)是一种进行性发展的常染色体显性遗传的神经系统疾病，为脊髓小脑性共济失调这组疾病中(spinocerebellar ataxia, SCA)的一种。1972年Nakano等〔1〕及1976年Rosenberg等〔2〕率先报道了该病，均来自葡萄牙移居美国的后裔。SCA这一组疾病中因症状与体征相互重叠，不同发展阶段甚至同一家族的不同病人在各时期的症状与体征也相差悬殊。因此，临床上无论是家族性或散发的SCA，无论是病理、影像学或神经电生理均不能准确地提供诊断，表型(临床)分类不能被普遍接受。随着分子细胞遗传学的发展, 基因突变分析可提供准确的临床诊断及鉴别诊断，为基因分型提出科学依据。目前，被克隆的基因有ataxin1(SCA1)、ataxin2(SCA2)、ataxin3(SCA3/MJD)、ataxin6(SCA6)、ataxin7(SCA7)及atrophin(DRPLA)，已定位未被克隆的有SCA4(16q22)、SCA5(11q11)、SCA8(10q24)。我们用MJD基因检测了16个家系、45例病人(6例散发病人)及30例有血缘关系的“正常人”的基因突变分析，发现了10个家系为MJD家族，余下的6个家系及6例散发SCA为非MJD。同时对MJD的临床、神经电生理及磁共振(MRI)资料进行总结。
1 材 料 和 方 法
1.1 病人来源
16个家系均来自浙江、45例病人及30例“正常”家族，均为汉族，没有查到与国外通婚史的证据。
1.2 基因突变检测
被检测对象均抽外周血10ml ，常规抽提基因组DNA〔3〕，作PCR模板。
PCR引物: MJD-F 5 CCAGTGACTACTTTGATTCG3 ; MJD-R 5 TGGCCTTTCACATGGATGTGAA3
PCR反应体系: 加dNTPs至终浓度200 nmol/L，引物至终浓度10μmol/L，Taq 酶1U(sangon), 2μl 10×缓冲液，Mg2+至终浓度1.5 mmol/L，模板DNA 100ng，加双蒸水至总体积20μl，在PE9600 PCR反应仪中进行PCR扩增。94℃预变性2min，94℃变性12s，58℃退火25s，72℃延伸30s，循环28次，72℃再延伸5min，4℃保存。
PCR产物检测: 每个样本PCR产物取5μl加1μl6×中性载样缓冲液，已测序样本同时在6％非变性PAGE中检测，银染显带，根据Marker标准分子量及已测序样本CAG重复次数计算扩增大小。
1.3 神经电生理及磁共振检查
在屏蔽室内，利用美国Viking-Ⅱ多用电生理诊断仪按常规测定10个MJD家系9例病人的正中神经，尺神经、桡神经、腓总神经、胫神经的运动及感觉传导速度，脑干诱发电位按国际10～20系统标准放置(FPz接地，Cz记录电极，测试侧耳垂参考，短声(click 75～85dB)刺激，对侧噪声(30dB)，叠加2 000次，带通3kHz～150Hz，阻抗小于2kΩ)，视觉诱发电位(模式翻转单眼(Cz～Oz )计算P100的潜伏期，超过本室正常人X±2.5SD判断为异常。磁共振使用1.0T(Magneton, siemens, Germany)分别作横断及矢状位扫描，常规T1及T2相。
2 结 果
2.1 MJD基因突变分析
PCR扩增片段的电泳见图1，相对应的家系见图2。从图1可见, 分子编号M1120、M1122、M1124、M1127为杂合子，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数在正常范围，而另一个等位基因CAG三核苷酸重复数超出正常范围，长度为390～4上一页 [1] [2] [3] 下一页
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