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氯化镉对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响 |
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with the control group. There was a dose-response relationship between cadmium and production of hydrogen peroxide, with a coefficient of regression (r) of -0.984 7. Conclusion Cadmium chloride, at the doses of 0.3, 0.6 and 1.2 mg/kg, could inhibit the phagocytic function of microphage, and the production of biological molecules, such as nitrous oxide, O-2, and hydrogen peroxide. It indicated that cadmium chloride could directly affect the transmission of antigen and non-specific defence function of macrophage.
【Key words】 Cadmium Microphage
镉对免疫系统的影响研究较多的是对T和B淋巴细胞功能的影响,而对巨噬细胞功能影响研究不多。Waseem等［1］在体外研究中用0.04～1.00 mmol/L的CdCl2观察到巨噬细胞的吞噬功能受到抑制。Leduc等［2］在体外研究中用0.5～3.8 μmol/L CdCl2观察到巨噬细胞产生O-2的能力受到抑制。本实验以0.3、0.6、1.2 mg/kg体重CdCl2连续给小鼠灌胃14天,观察CdCl2对巨噬细胞功能的影响。
材料与方法
一、主要试剂
CdCl2(北京五七六零一化工厂),硫乙醇酸钠(DIFCO),RPMI1640培养基(GIBCO), LPS(DIFCO), 辣根过氧化物酶(Sigma), 细胞色素C(Sigma)。
二、实验动物及处理
18～22 g雌性LACA小鼠,随机分为4个组,经灌胃方式每天给予CdCl2 0、0.3、0.6、1.2 mg/kg,连续灌胃14天。
三、小鼠腹腔巨噬细胞的获取
于实验前3天给小鼠腹腔注射3%硫乙醇酸钠2 ml。实验当天处死小鼠,用酒精消毒腹部,剪开小鼠腹部皮肤,向腹腔内注射无菌PBS 2 ml,轻揉小鼠腹部后,将液体吸出,再用PBS冲洗2次，进行细胞计数,分别用RPMI-1640培养液及PBS缓冲液调整细胞浓度至2×106/ml或1×106/ml待用。
四、观察指标及方法
1. 吞噬功能的测定：取1 ml 2×106/ml腹腔巨噬细胞加入24孔板内,置37℃、5% CO2条件下贴壁2小时,取出弃上清,漂洗,再加入0.1%中性红生理盐水液1 ml,置37℃、5% CO2条件下培养20分钟,取出,弃上清,漂洗,加入1 ml细胞溶解液(乙醇∶乙酸=1∶1),充分溶解后于540 nm波长处比色。
2.NO的诱生及测定：取1 ml 2×106/ml小鼠腹腔巨噬细胞加入24孔板内,置37℃、5% CO2培养箱中贴壁2小时,弃上清,漂洗后再每孔加入1 ml RPMI-1640,同时加入LPS使其终浓度为5 μg/ml。置37℃、5% CO2条件下培养24小时,取出上清至试管内,向试管中加入1 ml Greiss试剂(0.1% N-a-萘基乙二胺,1%磺胺,3% H3PO4),显色10分钟,于540 nm波长下进行比色。
3.H2O2的测定：取0.7 ml 1×106/ml小鼠腹腔巨噬细胞,加入0.15 ml(1 mg/ml)辣根过氧化物酶,0.15 ml(1 mg/ml)酚红液,0.1 ml(10 mg/ml)经血清调理后的酵母聚糖,于37℃水浴2小时,取出,置于冰浴中,经2 000 r/min离心10分钟,取上清加入PBS 2 ml,再加入4 mol/L NaOH 40 μl,于610 nm波长下比色。
4.O-2的测定：取1 ml 1×106/ml小鼠腹腔巨噬细胞,于37℃保温5分钟,加入0.1 ml(10 mg/ml)经调理后的酵母聚糖,再加入细胞色素C使其终浓度为(60 μmol/L)。于37℃水浴2小时,取出,置于冰浴中,再于2 000 r/min离心10分上一页 [1] [2] [3] 下一页
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