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不同方式给铝对大鼠体内金属硫蛋白诱导作用的初步研究 |
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行2周实验。于实验末处死大鼠，取肝脏和小肠称重后，在冰浴中制成匀浆，测定MT水平。
3.组织中MT测定［5，6］：取定量组织加等重预冷的匀浆液匀浆，再加3倍体积匀浆液充分摇匀后离心(15 500 g，10 min，4℃)。取上清液，加入3倍上清液体积的-20℃预冷的95%乙醇，于-20℃沉淀过夜，再离心(12 500 g，10 min，4℃)后弃上清留取沉淀。用0.01 mol/L Tris-HCl，pH值8.6的缓冲液10～15 ml溶解沉淀，经(10 000 g，10 min，4℃)离心后，取上清液上柱。经Saphadex G50柱分离组分，使用LKB层析系统，以0.01 mol/L Tris-HCl，pH值8.6的缓冲液洗脱，滴速0.8 ml/min，收集50～70管，紫外监测仪波长254 nm。收集的层析液每管分别测三波长紫外吸收值(270，254，220 nm；Shimadzn UV-240)；同时测Zn、Cu原子吸收值(Philips PU-9200)。
结果
图1～4显示了皮下注射方式给铝的处理组与对照组鼠肝经G50层析后的紫外与原子吸收图谱分析情况。在25～30管处蛋白的吸收峰不明显，而此处Cu、Zn的吸收峰即可反映高金属密度的MT的水平。对照组25～30管处Zn峰不明显，仅有小的Cu吸收峰，说明对照组肝MT的含量较少。处理组25～30管处Zn、Cu明显增高，图3、4对比了处理组与对照组的Zn和Cu水平。在25～30管处，处理
管数(每管12 ml)
图1 皮下注射给铝对照组(C)鼠肝层析后紫外吸收图谱
管数(每管12 ml)
图2 皮下注射给铝实验组(T)鼠肝层析后紫外吸收图谱
管数(每管12 ml)
图3 皮下注射给铝鼠肝层析后锌原子吸收图谱
管数(每管12 ml)
图4 皮下注射给铝鼠肝层析后铜原子吸收图谱
组Cu的峰高为对照组的1.9倍，而Zn峰高则高达28倍，说明皮下注射给铝对肝MT的诱导作用较明显。
附表显示了鼠肝与小肠组织层析后第25～30管处原子吸收与紫外吸收的测定情况。从25～30管层析液原子吸收测定值的6管平均水平及实验与对照组的配对t检验结果来看：皮下注射给铝组的Zn、Cu增加幅度最大，实验组分别为对照组的129倍和2.07倍(P<0.01)，Cu也有一定程度的增加(P<0.05)。从紫外吸收测定值的平均水平及实验与对照组配对t检验结果来看：反映蛋白水平的紫外吸收值实验组较对照组增加的幅度均不大(0.92～1.43)，说明实验组Zn、Cu水平的明显增加主要是由高金属密度的金属硫蛋白的增加所致。其中，以反映Zn-MT为主的220 nm紫外吸收值，在皮下注射组的鼠肝与灌胃组鼠小肠中有显著性增加(P<0.01)；以反映Cu-MT为主的270 nm紫外吸收值，在灌胃组鼠小肠中有一定程度的增加(P<0.05)。
附表 鼠组织25～30管层析液原子吸收与紫外吸收
测定情况(每组4只大鼠)
处理方式 组别 Zn-MT Cu-MT
Zn(10-6) 紫外吸收值
(220nm) Cu(10-6) 紫外吸收值
(270nm)
皮下给铝 对照组 0.005 3 2.247 1 0.220 8 0.311 7
鼠肝 实验组 0.685 0** 2.857 1** 0.457 0** 0.330 0
灌胃给铝 对照组 0.080 0 2.008 3 0.134 5 0.378 3
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