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铅对大鼠脑神经细胞钙分布和侧棘数的影响 |
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，各组分别取6只大鼠测脑铅和血铅浓度，8只作电镜钙细胞化学，另6只大鼠断头处死后，立即取大脑作正中矢状切开，左半只大脑作电镜硝酸镧示踪法，右半只大脑作Golgi染色。
2.电镜硝酸镧示踪法：固定液为4%硝酸镧1份加2份6%戊二醛-0.1 mol/L二甲砷酸钠(pH 7.4～7.6)。每只大鼠在左侧大脑顶叶皮质区取一小块组织置于固定液中固定3小时，随后在0.1 mol/L二甲砷酸钠-1%硝酸镧中漂洗15分钟，其间换液3次，在同样漂洗液中将固定好的组织块切成100 μm厚的组织片并收集在漂洗液中，在1%锇酸-1%硝酸镧中后固定2小时。常规脱水包埋，醋酸铀和柠檬酸铅双染色，在H-800电镜下观察。
3.电镜钙细胞化学：每只大鼠在左侧大脑顶叶皮质区取一小块组织，然后在3%戊二醛-0.09 mol/L草酸固定液中再分成约100 μm厚的组织片，对组织内钙进行细胞化学定位［3］。每只大鼠做5个包埋块，随机取2个切片，用醋酸铀和柠檬酸铅短暂染色2分钟，在H-800电镜下各组观察18张切片。
4.树突段棘数观察：右侧大脑作Golgi染色［4］，常规脱水，石蜡包埋，油镜下观察大脑皮层神经锥体细胞树突棘密度的变化。每组6只大鼠，每只大鼠观察6个神经细胞，取平均数作方差分析。
5.血和脑组织铅含量测定：麻醉动物，切断腹主动脉取血，然后开颅迅速取出大脑，称重。血液经稀硝酸处理，脑组织经硝酸、高氯酸处理后导入石墨炉原子化器原子化，根据特征谱线的吸收强度定量。
6.统计处理：用Student′s t检验方法对血铅和脑铅浓度、树突侧棘数观察数据作显著性检验。
结果
1.血铅、脑铅水平：低剂量组和高剂量组血铅浓度分别为对照组的1.67和2.46倍。低剂量组与对照组脑铅含量的差异无显著性，高剂量组的脑铅含量为对照组的1.34倍(表1)。
表1 低浓度铅染毒对幼鼠血铅、
脑铅含量的影响(每组6只鼠，±s)
组别 染毒剂量
(mg/L) 血铅(μmol/L) 脑铅(×10-4μmol/L)
低剂量组 10 0.311 1±0.023 5* 4.826 3±0.627 4
高剂量组 30 0.456 9±0.062 1* 6.418 9±0.772 2*
对照组 0 0.186 1±0.005 0 4.778 0±0.579 2
与对照组比较* P<0.01，下同
2.硝酸镧示踪细胞质膜渗透性观察：对照组镧盐颗粒只附着于轴突髓鞘的外侧和树突质膜的外侧，轴突和树突内看不见镧盐颗粒。低剂量组基本如对照组。高剂量组可见有些轴突局部髓鞘模糊、在轴突内和侧树突的质膜内侧可发现镧盐颗粒渗入。
3.钙细胞化学观察：对照组整个轴突很平直，粗细均匀，轴突内可见大量与轴突平行的单微管，微丝垂直于微管，与微管一起组成致密的网络。轴突外有髓鞘包裹，髓鞘中有钙颗粒沉淀，轴突内近胞体端很少看到钙颗粒，但在末端有较多钙反应颗粒；树突也是粗细均匀地向前延伸，并可见树突质膜外侧面的钙颗粒大大多于内侧面。树突的中段或远段可见分出较多呈树叉状的侧树突。低剂量组基本如对照组。高剂量组可见一些轴突不平直，粗细不均呈波浪状，沉积在轴突较内层髓鞘上的钙颗粒多于外层。轴突内很少看到微管与微丝组成的致密网络，但可见一些由两股细丝相互疏松地缠绕在一起的双股螺旋细丝；树突直径逐渐缩小地向前延伸，树突质膜内外钙颗粒分布不匀的现象不明显，树突的中段或远段呈树叉状的侧树突明显减少。
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