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吸烟与肺组织DNA加合物形成关系的研究 |
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2例肺癌患者肺组织DNA加合物含量［2］, 亦得到同样结果。本文报告了74例人肺组织DNA加合物的含量。与以前报道不同的是, 本研究对象除肺癌患者(男19例, 女18例)外, 还有37例非肺癌肺部疾病患者(男19例, 女18例)。目的在于探讨吸烟与肺组织DNA加合物的关系是否在肺癌患者与非肺癌患者之间及男女之间有无差异, 以期为进一步阐明吸烟与肺癌的因果关系提供证据。
材料与方法
1.主要试剂和仪器：核酸酶P1(nuclease P1), 前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase, PAP), 多核苷酸激酶(polynucleotide kinase, PNK), 腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase, Apy), 聚乙烯亚胺纤维素(PEI-Cellulose)薄层层析板, 苯并(a)芘(BaP), 购自Sigma公司; ［γ-32P］ATP (111 pBq*mol-1), 购自北京福瑞生物工程公司; 医用X光片, 化工部第二胶片厂生产; LS 6000液闪计数仪, Beckman 公司产品。
2.人肺组织样本：取自北京某医院外科住院病人手术切除部分(正常组织)。其中原发肺癌病例男19例, 女18例; 同期住院非肺癌肺部疾患病例男19例, 女18例; 合计74例。对入选病例, 同时记录年龄, 吸烟史, 被动吸烟史, 职业, 居住地, 使用燃料类型, 父母有无癌症及饮酒史等。
3.DNA加合物分析：按Gupta［3］的方法提取肺组织DNA, 当A260 nm/A280 nm的比值为1.8～2.0时认为纯度达到要求。DNA-加合物含量测定按Randerath等［4］的方法进行酶反应，32P后标记, 薄层层析, 放射自显影分析及液闪测定; DNA加合物的含量用相对加合物标记值(RAL)表示, 含义为每108核苷酸中所含加合物数。
4.质量控制：措施: 同时测定不同剂量BaP染毒小鼠肺组织DNA加合物含量, 观察剂量反应关系及作定性分析［5］; 所测人肺组织为双盲样本。
5.采用t检验对结果进行统计学处理, 差异显著性水平设在P<0.05。
结果与讨论
在本实验中我们选用了针对芳烃类DNA加合物的层析液并以BaP染毒小鼠的肺组织DNA加合物作为质控标准。检测DNA加合物的意义在于它提供的是致癌物的“内暴露”水平, 特别是在本实验中, 反映的是“靶器官中靶分子”水平的暴露剂量, 所以意义特别重要。本研究再一次证实, 吸烟可非常明显地引起肺组织DNA加合物含量增高(39例吸烟者, RAL=2.3±1.6; 35例不吸烟者, RAL=0.9±0.5; P<0.01)。我们的结果还显示, 如果控制吸烟因素, 男女之间, 非肺癌患者与肺癌患者肺组织DNA加合物水平无统计学差异(附表)。其解释是①化学致癌是一个缓慢过程, 我们的结果只体现了这一连续过程中的某一瞬间, 对非癌患者而言也许目前正处在癌前的某一阶段; ②我们的样本数还不足够大, 特别是男性不吸烟患者及女性吸烟患者的样本很难得; ③非癌与癌症患者肺中的DNA加合物性质有可能不同。有动物实验表明［6］, 4-胺基联苯致半数小鼠发生肿瘤时, 小鼠肝中DNA加合物水平为250 pmol/mg DNA; 而2-乙酰胺基芴致半数小鼠发生肿瘤时, 小鼠肝中DNA加合物水平为110 pmol/mg DNA, 说明我们还要考虑到不同的DNA加合物与生物学终点的关系。进一步分离鉴定加合物的结构和加合位点是十分有意义的工作。由于人体组织样本不易得到, 在为数不多的类似研究中, 人体组织多取自手术病人或尸检, 例数一般不多, 若想按严格的流行病学要求取样及选择对照组则十分困难。但毫无疑问, 这些实验结果对我们找出人群中DNA加合物水平与生物学效应之间的剂量-反应和时间-反应关系具重要的参考价值。
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