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杂交瘤细胞核糖核酸抗病毒作用 |
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照。
1.8 检测血清抗体 攻击后第0、3、7、14 天剪尾收集小白鼠血清，用ELISA检测血清抗体［5］。
1.9 结果统计 攻击4 d后开始计数，每天观察小白鼠发病和死亡的情况，直到攻击后的第14 天完成实验，统计结果。
2 结果
2.1 血清抗体检测 实验组、对照组和空白组动物血清抗体水平无显著差别。
2.2 动物发病、死亡时间 攻击4 d后开始计数，在这之前病、死的小白鼠数量应不计在内。结果见表1。动物50％死亡和100％的情况见图1。 从上面图表看出，杂交瘤细胞核糖核酸、人用狂犬病疫苗免疫小鼠的脾细胞核糖核酸不能阻止动物发病，但可以明显推迟动物的死亡时间。
表1 小白鼠被CVS攻击后的统计结果
Tab.1 The record result of mice attacked by CVS
Group 4th 7th 8th 9th 10th 11th 12th 13th 14th
Total S D S D S D S D S D S D S D S D
1 14 0 0 14 0 11 0 10 1 8 4 5 7 0 12 0 12
2 14 0 0 14 0 14 0 13 1 12 2 9 5 2 12 0 14
3 14 0 0 14 0 6 8 5 9 0 14 0 0 0 0 0 0
4 14 0 0 14 0 6 8 2 12 0 14 0 0 0 0 0 0
Note:1.RNA from hybridoma cell； 2.Positive control； 3.Negative control； 4.Blank control; S.Sick mice; D.Dead mice
图1 小白鼠被CVS攻击后50%和100%死亡情况
Fig.1 The statue of the mice attacked by CVS from rabies coming on to 50% and 100%
Note:D50:the death rate of 50%； D100:the death rate of 100%； 1:RNA from hybridoma cell； 2:Positive control； 3:Negative control； 4:Blank control
3 讨论
动物实验结果，杂交瘤细胞核糖核酸和常规方法制备的免疫核糖核酸均能够明显延长动物的生存时间，证明杂交瘤细胞中提取的核糖核酸与常规方法制备的免疫核糖核酸一样，具有一定的免疫传递和免疫保护作用。虽然杂交瘤细胞核糖核酸和常规方法制备的免疫核糖核酸均不能使动物完全产生抵抗病毒感染的能力，而最终死亡。但应该考虑本实验所使用的动物模型的局限性，因为现有的狂犬病模型直接用狂犬病毒CVS株进行颅腔攻击，病毒在脑部大量增殖导致动物发病死亡，免疫核糖核酸在这个过程中是否来得及完全起作用还不得而知，因此不能排除免疫核糖核酸在预防或治疗其它系统疾病会有更好的效果。本实验所用杂交瘤细胞核糖核酸是从分泌抗体类型为IgM的杂交瘤细胞中提取的，对狂犬病而言，抗体类型为IgM的抗体，无论其是抗糖蛋白还是抗核蛋白都是非中和性抗体［6］。从分泌非中和性抗体的杂交瘤细胞中提取的核糖核酸有明显延长动物生存时间的作用，证明免疫核糖核酸有着不同寻常的作用方式。尽管本实验采用分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞核糖核酸，但未能检测到小鼠产生特异性抗狂犬病毒糖蛋白的抗体，这一结果给出了如下提示：①免疫核糖核酸的体液免疫传递作用不是由分泌IgM类抗体的B淋巴细胞的核糖核酸产生，②对狂犬病动物模型而言，能够传递体液免疫反应的细胞核糖核酸可能较非传递体液反应的细胞核糖核酸要好，因为常规抗狂犬病毒血清具有肯定的保护作用，③免疫核糖核酸可以传递非体液免疫信息，而且这种非体液免疫反应有一定的抗病毒作用，④B淋巴细胞的核糖核酸能够传递免疫反应信息，但不一定是体液免疫反应的信息。 综合整个实验结果，从分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取的核糖核酸与从用人用狂犬病浓缩疫苗免疫小鼠的脾细胞中提取的核糖核酸腹腔注射小鼠有着相同的作用，均能明显延长实验动物的生存期，因此杂交瘤细胞中提取的核糖核酸可以认为是一种免疫核糖核酸，它具有一定的抗病毒作用，证明能够用杂交瘤细胞制备免疫核糖核酸，解决传统的从免疫动物的肝、脾等细胞中上一页 [1] [2] [3] 下一页
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