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杂交瘤细胞核糖核酸抗病毒作用 |
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张涛 封江南
摘 要 目的：从分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体(IgM)杂交瘤细胞中提取核糖核酸，研究其抗狂犬病毒的作用。方法：腹腔注射该种核糖核酸4 w后用狂犬病毒CVS株进行颅腔攻击。结果：该核糖核酸能明显延长动物的生存时间。结论：该核糖核酸对狂犬病毒且有一定的抵抗作用。
关键词 免疫核糖核酸 杂交瘤 单克隆抗体 狂犬病毒
中国图书分类号 R392.11
Effect of anti-virus of RNA from hybridoma cell
ZHANG Tao, FENG Jiang-Nan.
Wuhan Institute of Biological Products, Ministry of Public Health, Wuhan 430060
Abstract Objective:To study the possibility of RNA extracted from hybridoma cell as RNA and the relation between this RNA and tranditional RNA. Methods:Extracting RNA from the hybridoma cell which secrets monoclonal antibody(IgM)against the G-protein of rabies virus and injecting these RNA into cranial cavity in four weeks.Results:The RNA extracted from hybridoma cell could delay the dying of mice obviously. Conclusion: The RNA extracted from hybridoma cell had the same function as the traditional immune RNA,wihch could provided a new nethod to study the mechanism of immune RNA.
Key words Immune RNA (iRNA) Hybridoma cell Monoclonal antibody Rabies virus
免疫核糖核酸具有传递免疫反应的作用［1］，以往免疫核糖核酸都是从免疫动物的器官(肝、脾等)中提取，提取的免疫核糖核酸有效含量较低，其疗效不尽人意。本文从分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取核糖核酸,观察其抗病毒作用，旨在寻找制备高浓度、高特异性免疫核糖核酸的新方法，并对其作用机理作进一步研究。
1 材料与方法
1.1 材料 分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体(IgM)杂交瘤细胞、人用狂犬病浓缩疫苗(批号：970512)、CVS 8代狂犬病毒毒种、12 g左右小白鼠、8周龄Balb/c小鼠等均由卫生部武汉生物制品研究所制备或提供。
1.2 实体瘤的制备［2］ 将培养的分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体(IgM)杂交瘤细胞注射入Balb/c小鼠背部脊柱两侧皮下，10 d左右手术摘取实体瘤。
1.3 杂交瘤细胞核糖核酸的提取 采用热酚法［3］。将获得的杂交瘤匀浆，用pH<7.0的水饱和酚进行抽提。核糖核酸的紫外吸收值A260/A230、A260/A280均应大于1.9。核糖核酸的含量根据下面公式计算： RNA浓度＝OD260/0.022×稀释度÷1 000＝mg RNA/ml。
1.4 提取阳性核糖核酸 将人用狂犬病浓缩疫苗5倍稀释［4］，腹腔免疫Balb/c小白鼠，每只0.5 ml，1 w后加强免疫，14 d手术取脾脏。热酚法提取脾脏细胞核糖核酸。
1.5 提取阴性核糖核酸 取正常Balb/c小白鼠脾脏，热酚法提取核糖核酸。
1.6 小白鼠腹腔注射核糖核酸 将杂交瘤细胞细胞核糖核酸、免疫Balb/c小鼠脾脏细胞核糖核酸、正常Balb/c小鼠脾脏核糖核酸分别注射到体重12 g左右的小白鼠腹腔，20 μg/只。每种核糖核酸注射15只小白鼠。
1.7 颅腔攻击小白鼠 小白鼠注射核糖核酸4 w后用狂犬病毒CVS株进行颅腔攻击［4］，每只小白鼠的攻击病毒量为32 LD50。另取15只同期正常小白鼠进行同样的攻击作为空白对[1] [2] [3] 下一页
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