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抗纤复方及TGF |
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王皓 高春芳 孔宪涛
摘 要 目的：研究TGF-β及中药抗纤复方对小鼠前胶原α2(Ⅰ)基因上游启动子活性的影响。方法：以含小鼠胶原α2(Ⅰ)基因上游0.4、0.8、2.0 kb启动片段为研究靶序列，以氯霉素乙酰基转移酶（CAT)作报告基因，应用基因转染技术研究小鼠胶原启动子活性。结果：TGF-β可促进小鼠前胶原α2(Ⅰ)基因启动序列的启动活性，而中药抗纤复方可明显抑制其启动活性。结论：TGF-β和中药抗纤复方都可作用于胶原α2(Ⅰ)基因调控片段，进而促进或抑制胶原合成。
关键词 TGF-β 抗纤维复方 胶原 启动子
中国图书分类号 R392.2
The effect of Chinese herbal and TGF-β on promoter activity in
mouse α2(Ⅰ) procollagen gene
WANG Hao， GAO Chun-Fang, KONG Xian-Tao.
Clinical Immunology Center, Changzheng Hospital， Shanghai 200003
Abstract Objective: To study the effect of TGF-β and Chinese herbal on promoter activity in mouse α2(Ⅰ) procollagen gene. Methods：The upper stream 0.4、0.8、2.0 kb sequences in mouse α2(Ⅰ) procollagen gene 5′ flanking region were studied with CAT as reporter gene and gene transfection method.Results： The result revealed that TGF-β increases promoter activity of mouse α2(Ⅰ) procollagen gene while Chinese herbal significantly inhibits the promoter activity.Conclusion： TGF-β and Chinese herbal increase or inhibit collagen synthesis by regulating promoter element in procollagen gene.
Key words TGF-β Anti-fibrotic compound Collagen Promoter
纤维化性疾病是多种器官慢性炎症反应的常见转归，早期诊断和治疗甚至逆转纤维化是临床的难点［1］。文献报道TGF-β在纤维化过程中起重要作用，它能刺激细胞外基质（ECM)的产生，抑制蛋白酶和基质酶的活性，从而促使ECM沉积，促进纤维化发生发展。研究证明TGF-β单抗可抑制小鼠成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达［2］，即TGF-β能促进胶原基因表达，但对其促纤维化机制尚不完全清楚。TGF-β本身促进胶原表达的作用可发生在转录水平或转录后水平，为进一步在基因水平探讨TGF-β促纤维化的作用机制［3-5］，本文以含小鼠胶原α2(Ⅰ)基因上游0.4、0.8、2.0 kb启动片段为研究靶序列，探讨TGF-β对小鼠胶原α2(Ⅰ)基因上游不同长短启动序列转录活性有无促进作用。另外近年来发现中药在抗纤维化治疗中有较好的疗效，故本研究同时对中药抗纤维化复方的抗纤维化机制也进行探讨。
1 材料与方法
1.1 细胞和试剂 小鼠NIH/3T3细胞(中科院细胞所)以含10%FCS的1640(Gibco)培养，0.125%胰蛋白酶(Sigma)消化传代。rhTGF-β(Boehringer Mannheim)，中药抗纤维化复方以黄芪、丹参、郁金等配伍及提取的无菌制剂(上海曙光医院张斌博士惠赠)。
1.2 pCOL0.4、pCOL0.8重组体构建 含小鼠α2(Ⅰ) 胶原-2 kb～+54 bp序列的质粒pAZ1009[1] [2] [3] 下一页
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