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Th1 Th2相关细胞因子基因检测方法的建立 |
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刘杰 魏海明 田志刚 冯进波 孙汭
摘 要 目的：建立检测Th1/Th2相关细胞因子的方法。方法：设计6对用于IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IFNγ和β-actin 基因扩增的引物，建立可用于Th1/Th2相关细胞因子检测的RT-PCR技术，同时用切口平移法制备6种细胞因子的cDNA探针，建立RNA斑点杂交技术。结果：用RT-PCR和RNA斑点杂交技术检测20种肿瘤细胞株，发现11/20为Th2型细胞因子表达，8/20为Th0型，1/20未检测到细胞因子。结论：RT-PCR技术和RNA斑点杂交技术是检测Th1/Th2相关细胞因子的有效方法。
关键词 Th1/ Th2 细胞因子 肿瘤细胞 逆转录聚合酶链反应 RNA斑点杂交
中国图书分类号 R730.3
Establishment of detecting methods of Th1/Th2 cytokine gene
LIU Jie，WEI Hai-Ming,TIAN Zhi-Gang et al.Shandong Cancer Biotherapy Center，Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250062
Abstract Objective:To establish methods for sensitive,rapid,economical detection of Th1/Th2 cytokine gene expression.Methods:Sixpairs of primers specific for the IL-2，IL-4，IL-10，IL-13，IFNγ and β-actin were designed.A sensitive and rapid method for detection of Th1/Th2 cytokine genes by RT-PCR was established.Meanwhile another method:the RNA hybridization with six cDNA probes were established.Results:The RT-PCR reaction and RNA hybridization was used to test five kinds of cytokine mRNAs expressed 20 tumor cell lines Th2 mRNAs were expressed in eleven cell lines;The mRNAs in eight cell lines.Conclusion:The preliminary results suggested that RT-PCR and RNA hybridization might be used to test Th1/Th2 cytokine gene expression.
Key words Th1/Th2 Cytokine Tumor cell RT-PCR reaction RNA hybridization
正常机体的CD4+T细胞，可分泌Th1/Th2 2类细胞因子，Th1类细胞因子包括IL-2、TNFβ和IFNγ，介导细胞免疫应答，与机体抗肿瘤抗病毒作用有关；Th2类细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-6、 IL-9、IL-10和IL-13等，介导体液免疫应答，与移植物耐受、抑制自身免疫疾病有关。机体Th1/Th2平衡失调后，可导致肿瘤发生、细菌、病毒等微生物感染以及自身免疫病、变态反应性疾病和移植排斥反应的发生，检测机体Th1/Th2相关细胞因子，对认识疾病的发生发展规律及以调整Th1/Th2平衡为目的，设计相应的治疗方案具有重要意义［1，2］。近期有人发现某些肿瘤细胞亦可分泌Th2类细胞因子，并与病程进展有关［3，4］ 。本文建立RT-PCR和RNA斑点杂交方法，检测人外周血淋巴细胞和20株肿瘤细胞中与Th1/Th2相关的5种细胞因子表达状况，获得较好结果，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 肿瘤细胞株和人外周血单个核细胞分离 淋巴瘤5株，骨髓瘤2株，白血病2株，肺癌4株，乳腺癌3株，黑色素瘤2株，膀胱癌和结直肠癌各1株，依各细胞性质分别行贴壁或悬浮培养。人外周血单个核细胞分离采用淋巴细胞分层液，按常规方法进行。
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