|
中药海乐得对部分肾切除大鼠残余肾脏表达PAI |
| |
ation of PAI-l and TGFβ gene expressions.
MeSH Plasminogen inactivators; Transforming growth factor, be ta; Drugs, Chinese herbal
大鼠肾脏部分切除后，残存的肾脏通常呈代偿性改变，导致肾小球肥大，继而出现高血压、蛋白尿、肾小管间质纤维化、单核细胞浸润、肾小球硬化等多种病理改变。有研究表明，在肾脏部分切除后，残余肾脏中TGFβ表达明显增高［1］，而T GFβ在细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的积聚过程中起着重要的作用。PAI-l是纤 溶酶原激活物(PA)/纤溶酶系统中一个重要调节因子，也是ECM降解的一个关键抑制因子，因 而在ECM积聚和肾小球硬化过程中起着重要作用。文献报道肾脏放射性损伤以及增殖性肾炎 模型中PAI-l mRNA表达明显增高，原位杂交结果提示，PAI-l的表达与肾脏损伤呈正相关 ［2］。本文采用5/6肾切除大鼠模型，利用原位杂交、Northern印迹杂交技术检测了 残余肾脏中PAI-l及TGFβ mRNA表达，观察了中药制剂海乐得对上述指标的影响。
材料与方法
(一)动物：雌性Wistar大鼠30只，体重180～200 g，由本医院实验动物中心提供。
(二)药品及试剂：海乐得(HLD)胶囊由海乐得研究课题组提供。批号为：9700624；9700626 ；9700 628(实验用三批等量混合物)。处方组成主要为水蛭、当归、生地、党参等。本品功能： 活 血化瘀，健脾化浊，补气养血。RNAzolTMB，美国Tel Test Inc产品。PAI-l原位 杂交探针制备，将PAI-l cDNA片断(3-256)碱 基序列(253bp)亚克隆至Bluescript 11SK质粒中，宝灵 曼公司DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)标记 cRNA探针。TGFβ、三磷酸甘油醛脱氢 酶(GAPDH)cDNA探针由美国Vanderbilt大学lchikawa教授惠赠。同位素标记试剂盒Stratagen 公司产品。
(三)动物分组及给药方式：适应性喂养1周后，随机分成3组：(1)假手术组(sham)：(2)5/6N X组；( 3)5/6NX+海乐得组，每组8只。5/6NX组、5/6NX+海乐得组行5/6肾切除。5/6NX+海乐得组按 22 g/kg体重给药，术后2周开始喂药，治疗6周，给药方式用蒸镏水配成1.1 g/mL浓度的混悬液，混于动物饮水中喂食(详细记录动物的饮水量及剩余量，并根 据情况调整其饮水量以保证动物实际饮药量不低于22g.kg-1.d-1)。
(四)动物模型制备：大鼠用硫贲妥钠(50 mg/kg ip)麻醉，俯卧位固定于鼠台上，暴露肾脏 ，剥离肾包膜，切除肾脏的上、下约占左肾的2/3。1周后，在脊柱右侧中1/3旁1.5～2 cm 行纵行切口(切口位略高于左侧)，切除右侧肾脏。假手术组只作肾包膜剥离，不作肾脏切除 。
(五)实验标本的留取：海乐得治疗6周后，留取24 h尿，测定尿蛋白； 称体重，乙醚轻麻， 眼眶内取血，分离血清，剖开腹腔取出残余肾脏，分别留取光镜切片、冰冻切片样品，制备 RNA样品。
(六)血生化指标的测定：7150型自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胆固醇(C H)、甘油三酯(TG)、血红蛋白(Hb)检测用光电比色法。
(七)平均肾小球面积测定：于每张病理切片上选测12个完整肾小球，顺序由皮质到髓质，其 中皮质及髓质部分别选测6个，12个肾小球面积中去除一个最大值，去除一个最小值，最后 均数为平均肾小球面积。假手术、对照和海乐得治疗三组，每组均检测8个样本。操作程序 为：于计算机启动图像分析系统，将病理切片图像输入，用鼠标沿肾小球毛细血管丛描画出整个肾小球，经计算机自动处理后，给出所描画的肾小球的面积。
(八)组织原位杂交：冰冻切片，多聚甲醛固定，PBS洗涤，蛋白酶K消化，PBS洗涤，再经多 聚甲醛固定，稀酸处理后，PAI-l cRNA探针杂交42℃过夜，梯度SSC，RNaseA,梯度SSC，碱 性磷酸酶标记(1：1000稀释)1～2 h，NBT系统发色，封片观察结果。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 低氧致肺动脉平滑肌细胞增殖及其作用机制初探
下一个医学论文： 黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞钙通道及钠钙交换载体的效应
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文