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P16基因与散发性食管癌的研究 |
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龚嫦虹 邱定红 黄鹰 周晓雷 王为未 张丽珊
摘 要：本文对47例散发性食管癌中P16基因的第二外显子，先用外侧引物扩增进行缺失筛查，再用三对内侧引物扩增经首次外侧引物扩增所得的PCR的产物，进行套式PCR结合SSCP及PCR直接银染测序技术检测突变。结果检出食管癌中有2例缺失，5例突变。在检测出的食管癌的突变中，我们发现所有的突变均为125位密码子的错义突变，为CGG→CTG的颠换，使p16蛋白该位的碱性的精氨酸变为酸性的亮氨酸。这一结果提示P16基因可能与食管癌的发生密切相关。本文参考P16基因的结构功能区对所测突变进行了讨论，提出了进一步研究的设想。
关键词： 食管癌; P16基因; 突变; 银染测序
中图分类号： Q754;R735.1 文献标识码： A
文章编号： 0253－9772(2000)01－0007－10
Investigation of P16 Gene and Sporatic Esophageal Tumors
GONG Chang hong QIU Ding hong HUANG Ying ZHOU Xiao lei WANG Wei wei ZHANG Li shan
(Department of Biology,Nanjing Railway Medical College,Nanjing 210009, China)
Abstract:To elucidate the involvement of abnormalities of exon2 of P16 gene located at chromosomal region 9p21 in the development of upper disgective tract cancer,we analysed DNA from 47 patients with sporadic esophageal tumors using PCR,nested_PCR,SSCP,PCR_direct DNA sequencing.We detected allelic deletions in 2 samples(4.2％),missense mutations in 5 samples(10.6％).Furthermore these mutations were the CGG→CTG transversion at the same site of the codon 125,leading to the change from Arg→Leu,once transcribed.
Key words： Esophageal tumors; P16 gene; Mutation; Silver_sequencing
1994年Kamb报道的P16基因是一种抑癌基因，它位于9号染色体短臂的2区1带上，全长约8.5kb，由3个外显子(126bp,307bp,11bp)和两个内含子组成，它的外显子序列编码一种已知的细胞周期素激酶的抑制蛋白p16〔1〕。进一步的研究发现，P16编码的蛋白通过特异地与细胞周期素激酶CDK4、CDK6结合，而抑制CDK4/cyclinD的酶活性，从而使Rb蛋白脱磷酸化，控制G1/S期的进展〔2〕。因此如果P16基因发生了突变、缺失，或者p16蛋白发生质和量上的改变，则必然导致细胞的无限增殖，从而引起肿瘤的发生。
在对一些来源于肺、乳腺、脑、骨、皮肤、膀胱、肾，卵巢、食管、结肠等肿瘤细胞株的研究中，和对家族性肿瘤如恶性黑色素瘤等的研究〔3〕，及在对神经胶质瘤、肺癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病等原发性肿瘤研究中，P16表现出较高的缺失突变频率，或者发现p16蛋白在肿瘤组织中的低水平表达和不表达〔4～10〕,这些事实体现了P16基因在肿瘤的发生过程中扮演着重要的角色。
图1 4对引物的扩增产物在P16基因中的相对位置
目前所发现的突变热点主要位于P16的第一、二外显子。本课题应用了PCR、套式PCR，SSCP、PCR产物直接银染测序技术对47例散发性食管癌P16基因第二外显子的突变、缺失进行了检测，并对P16基因突变缺失与肿瘤病理分型，恶性程度等生物学行为指标进行了相关性讨论，为深入了解肿瘤发生发展的分子遗传学机理奠定了基础，并为临床诊断提供了一些客观的依据。
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