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应用雄性激素诱导异育银鲫性转化的研究 |
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产。
1.3 浸泡液和药饵的配制
1.3.1 浸泡液的配制
取1 ml(50 mg)丙酸睾丸素溶于50 ml的酒精中搅拌半小时，母液浓度为1 mg/1 ml，4℃保存。吸1ml丙酸睾丸素的母液加入1L的Holtfreter 液(或贮存水)中，试液在使用之前配制。
1.3.2 甲基睾丸素药饵的配制
用配合饲料（鱼粉50％，豆饼粉25％，面粉25％）配制成每克饲料含有20～200μg的MT药饵，使MT的添加量随鱼的生长而逐渐增加(20～200μg/g)。
1.4 处理方法
1.4.1 浸泡试验
对异育银鲫胚胎发育的各个时期进行浸泡，受精卵处理14天，肌肉效应期13天，心跳期11天，摄食期10天。
1.4.2 药饵试验
对50日龄的异育银鲫幼鱼投喂含MT的药饵4个月。开始时，MT药饵的日投喂量为鱼体重的7％，随着幼鱼生长，日投喂量逐步调整为鱼体重的4％。
1.4.3 组织学观察
为了进一步检验性转化的结果，除了挤压8～13个月龄的鱼腹部获得精液，在显微镜下观察精子活动，还对性腺进行组织学观察和分析。性腺用Bouin氏液固定，石蜡切片，H-E染色。
2 结 果
2.1 浸泡试验
异育银鲫不同发育时期的胚胎，经丙酸睾丸素溶液浸泡试验，产生11.0～13.6％的雄性鱼和10.5％～27.3％的兼性鱼。各组性转换率的详细结果见表1。
表1 异育银鲫不同发育期的胚胎经丙酸睾丸素溶液浸泡后的性转换率
胚胎发育期 处理时间(天) 胚胎(苗) 饲养日期 试验结束时成活鱼数 性比(%)
试验数 雄性 雌性 雌雄兼性
受精卵 14 116 96.04．09～10.07 33 12.1 60.6 27.3
肌肉效应期 13 189 96.04.11～12.06 59 13.6 62.7 23.7
心跳期 11 113 96.04.11～12.06 38 13.2 76.3 10.5
摄食期 10 212 96.04.11～12.06 82 11.0 76.8 12.2
对照 0 130 96.04.11～12.06 58 0 100 0
2.2 药饵试验
从50日龄开始，对异育银鲫幼鱼投喂含有甲基睾丸素的药饵，连续投喂4个月。然后在常规条件下饲养2个月、4个月和7个月，诱导出20％以上的雄性鱼，而且有部分转性鱼的两侧性腺出现明显大小的差异。详细检测结果见表2。
表2 口服MT的异育银鲫性转换率
组别 试验日期 试验鱼数 试验结束时成活鱼数 性比(%) 雌性卵巢大小不一的比例(%)
雄性 雌性 雌雄兼性
试验组 1)1995.06～1995.12.15 60 28 21.4 78.6 50
2)1996.04.23～1996.12.10 136 88 20.5 79.5
3)1997.06.25～1998.05.16 120 55 21.8 69.1 9.1
对照组 1)1995.06.19～1995.12.15 68 32 0 100
2)1996.04.23～1996.12.10 130 58 0 100
3)1997.06.25～1998.05.16 120 65 0 100
2.3 组织学观察
饲养8～11个月的各组异育银鲫，体长达6.3～11.2 cm。其中经处理的转性鱼轻压其腹部，可见精液流出,镜检可见成熟精子活动(图1)。解剖发现这类“雄鱼”的性腺发育成较宽的精巢（图2），精巢切片中可以看到精原细胞、初级和次级精母细胞，以及大量的精细胞。
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