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饲料锌过量对幼鼠脑发育及学习记忆的影响及其机理探讨 |
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rence in AAR between Groups PF and AL, but more movement was observed in them. Nitrous oxide in hippocampus raised and somatostatin decreased in Group ZE2, and total amount of excitatory and inhibitory amino acids in brain tissues raised, especially for glutamic acid. Neurones, gliocytes and organella in the CA1 region of hippocampus in the Group ZE2 showed degeneration, necrosis and rupture of synaptic bolus to varied extent. Conclusion Excessive zinc in fodder could significantly affect brain development and functions in young rats with multiple mechanisms.
【Key words】 Zinc Brian Learning Memory Behavior
微量元素锌对脑功能的影响已受到国内外学者的关注。缺锌明显影响幼鼠脑发育及学习记忆［1］，但饲料锌过量对脑发育和功能尤其是学习记忆、活动行为的影响报道较少。我们通过建立幼鼠模型，观察过量锌对幼鼠脑发育及学习记忆和活动状况的影响，并探讨其机理。
材料和方法
1.动物模型的建立：动物模型共分5组。Wistar健康临产孕大鼠10只随机分为4组，从产仔当日起每只母鼠及其仔鼠单笼饲养于塑料笼具内，分别饲以过量锌1组(ZE1组，2笼)、过量锌2组(ZE2组，4笼)、对照组(AL组，2笼)饲料(Flanagna配方［2］中加入硫酸锌，使锌含量分别为400、1 000、100 mg/kg)，及ZE2组的配对组(PF组，2笼)。AL、ZE1、ZE2组自由进食各自的饲料，PF组进食AL组饲料，但进食量为ZE2组前1天的进食量。第5组为ZE2组的恢复组(ZE2R组)，于断乳后从ZE2组仔鼠中随机分出，进食AL组饲料。5组均自由饮用去离子水(含锌<0.01 mg/kg)。食具为玻璃器皿，使用前用酸浸泡，并用去离子水冲洗，使用中每日清洗后再用去离子水冲洗。室温控制在21～22℃，湿度45%～50%，每日光照12小时(人工控制)。仔鼠由母鼠授乳至28日断乳后分笼，每笼2只，饲养于不锈钢笼具中。除ZE2R组外，继续分别饲以AL、ZE1、ZE2和PF饲料，每日在同一时间记录饲料量，每7日测体重1次，50日龄进行实验。
2.检测指标及方法：
(1)微量元素锌测定：采用美国IL-AA 951型原子吸收分光光度计火焰法测定，均采用质量控制。饲料锌用干化灰化法，血清锌用直接稀释法，海马锌用酸消化法处理标本。
(2)脑组织游离氨基酸测定：股动脉放血后断头迅速分离出脑，取部分大脑皮层及右海马，分析天平称重后，置于冰镇玻管内，按25 mg组织1 ml的比例加入4℃ 10%磺基水杨酸匀浆离心，取上清液用锂盐缓冲液1∶3进行稀释，用黄金6300系列氨基酸自动分析仪(Beckman公司产品)检测兴奋性氨基酸：(谷氨酸、门冬氨酸)和抑制性氨基酸：(丙氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸和甘氨酸)。
(3)海马一氧化氮测定：取AL和ZE2组幼鼠各7只，股静脉放血后，断头取脑，分离出左海马称重后，加入生理盐水低温匀浆，用日本UR-200P超声震荡和打碎(100 W)每次10秒，共3次，低温离心以2 000 r/min，15分钟，取上清液0.7 ml，加入2.5% 活性碳0.1 ml、混匀10秒，再以2 000 r/min离心10分钟，取上清液采用罗向东［3］法间接测定海马一氧化氮(NO)含量。
(4)海马生长抑素含量测定：取上述幼鼠右海马称重后，加入1.0 mol/L HCl充分匀浆后，用等量1.0 mol/L NaOH中和，4℃离心取上清液，用RIA法测定海马生长抑素(SS)含量。
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