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肿瘤组织中端粒酶活性的研究 |
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郝玉宾 田竟生 李淑婷
摘 要：目的 了解端粒酶活性高低与肿瘤恶性程度关系。方法 用TRAP-ELISA和我们改进的TRAP银染方法，对肿瘤组织端粒酶活性进行半定量检测。结果 端粒酶阳性率分别为：胶质瘤星形Ⅱ级40%，Ⅲ和Ⅳ级100%，肠癌84.62%，食管癌90%。结论 端粒酶活性与肿瘤恶性程度密切相关，是诊断恶性肿瘤、判断愈后的良好指标。
关键词：肿瘤；端粒；端粒酶
分类号：Q55 文献标识码：A
文章编号：0529-1356(2000)01-43
THE STUDY OF TELOMERASE ACTIVITY IN TUMORS
HAO Yu-bin
(Beijing Institute for Neuroscience,Capital University of Medical Sciences,Beijing 100054,China)
TIAN Jing-sheng
(Beijing Institute for Neuroscience,Capital University of Medical Sciences,Beijing 100054,China)
LI Shu-ting
(Beijing Institute for Neuroscience,Capital University of Medical Sciences,Beijing 100054,China)
Abstract：Objective To investigate the correlation between telomerase activity and pathologic grade of the tumors.Methods We detected telomerase activity in tumors by TRAP-ELISA and TRAP-Ag+ stain methods.Results Telomerase positive rate is 40% for astrocytoma Ⅱ,100% for astrocytoma Ⅲ and Ⅳ,84.62% for intestinal cancer,90% for esophaeal carcinoma.Conclusion There is a significant correlation between telomerase activity and pathologic grade of the tumors.
Key words：Neoplasm; Telomere; Telomerase▲
最近研究表明染色体的端粒丢失和端粒酶的激活与肿瘤的进程有密切关系。自1994年Kim［1］借助PCR技术建立了敏感的端粒酶检测方法(telomerase repeat amplification protocol,TRAP),已检测了大量细胞系、肿瘤和体细胞，结果显示：正常体细胞中端粒酶活性受到限制，但在癌细胞和永生化细胞系中端粒酶被再激活。为了进一步探讨端粒酶在脑肿瘤、肠癌、食管癌中的表达，端粒酶活性高低与肿瘤恶性程度和临床病理特征的关系，我们应用最新建立的TRAP结合ELISA方法，对肿瘤组织端粒酶活性进行了半定量检测，同时，我们改进建立了TRAP银染方法。
材料和方法
1.标本
手术后取下的活体组织，迅速放入RPM1640培养基，送往实验室，液氮保存。细胞系sy5y(人神经母细胞瘤细胞系)
细胞系DBTRG-05MG(多型性胶质母细胞瘤)由首都医科大学神经科学研究所提供。
2.实验操作
2.1 端粒酶TRAP-ELISA(Boehringer Mann-heim Kit)
2.1.1 从组织中提取总蛋白：(1)将冷冻组织在恒冷切片机中-23℃切片，厚15μm，取50片放入灭菌离心管或取约30mg组织用无菌眼科手术剪尽量剪碎；(2)加入200μl裂解液(Tris.HCl,MgCl2,EGTA,CHAPS等)，冰浴30min；(3)4℃16 000g离心20min；(4)小心吸取上清于一新管(确保无细胞碎片)，吸取约150μl。
2.1.2 TRAP反应：(1)对照：取20μl蛋白提取液65℃，10min使端粒酶失活，做阴性对照，阳性对照来自试剂[1] [2] 下一页
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