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1995 1997年中国部分地区麻疹病毒流行株基因型分析 |
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CAGAGGTCAATTC3′，H2R(－8414) 5′AGCATGTCTCCATTCGCAACT3′，H3(＋7852) 5′CAGAGGTCAATTCTCAAACA3′，H4R(－8404)5′CATTCGCAACTTGTCATCTG3′；N1(＋1304－1323) 5′TGCATACTACTGAGGACAA3′，N2R(－1694－1674) 5′TCTCGCACCTAGTCTAGAA3′，N3(＋1324－1341) 5′ATCAGTAGAGCGGTTGGA3′，N4R(－1641－1624) 5′GTCTGAGCCTTGTTCTTC3′。
四、参考病毒株：EDw54野毒株，Mor(为国外疫苗株)，Chang China57、94为辽宁现用长春麻疹疫苗毒株。上述病毒基因序列来自基因库，其他国家的MV流行株基因序列有的来自基因库，有的来自CPHL.UK。
五、MV-RNA提取方法：采用Boom等(1990)报道的硫氰酸胍-石英硅粉方法［7］。
cDNA合成、RT-PCR二步法、MV-H、N基因核苷酸片段序列测定、核苷酸序列分析方法均按Jin L使用的方法(1997、1996)［5，8］。
结 果
一、抗MV-IgM ELISA结果：46例疑似麻疹病人中，37例抗MV-IgM ELISA阳性，8例阴性，1份未检测。8份抗MV-IgM阴性中有3份RT-PCR MV-RNA阳性，此3例可能由于采血时间距发病时间很短的原因，所以抗MV-IgM ELISA阴性。
二、MV-H、N基因核苷酸片段RT-PCR结果：采集的46份唾液，MV-H、N基因RT-PCR 31份阳性；32份尿液19份阳性。MV-H、N基因PCR产物分别是552bp，317bp大小核苷酸片段。
三、MV-N基因核苷酸片段测序分析结果：1995～1997年期间的MV流行株按年份、地区、流行特征选10株N基因测序分析(282nt nt1235-1516)。结果：SY2 China97株(发病前、后未注射麻疹减毒活疫苗)与EDw54野毒株完全相同，与疫苗株(Chang China57、94)在此片段只有一个核苷酸与其不同，是A到C的改变。其余9株测序结果也不同于Jin L(1997)［5］报道的英国(Ⅰ-Ⅲ)及Rima等(1995)［9］报道的其他国家MV流行株(A-G)基因型，所以本文称之新基因型。无根基因树分析图形看SY2 China97株分在ED-like组，其它9株在新基因型组见图1。MV-N基因C末端氨基酸测定分析也同样显示此结果，SY2 China97株与EDw54株相同，其余9株均有8AA不同于EDw54株和疫苗株，个别MV株另外还有1-4AA的改变。
图1 中国MV流行株(新基因型)与国外报道的MV基因型在N基因nt 1235-1516序列的基因关系：无根树形使用NDAStar Packge中分组程序绘制，括号内A-G是Rima等1997年设定的基因型，UK MV株来源参考Jin 1997的报道。
另外计算机分析中国MV流行株N基因核苷酸片段序列与EDw54株、疫苗株及其它国家其它基因型核苷酸片段的百分差异看，SY2 China97与EDw54株相差为零，与疫苗株相差0.4%，其余9株(新基因型)与疫苗株和EDw54株相差7.1%～8.8%，与其它国家其它基因型最大差异为15.4%，中国MV新基因型内之间相差0%～3.7%。还可以看出同一爆发点的DL1 Ch95n、DL2 Ch95n及HLD30 China97n、HLD32 China97n的基因序列完全相同。
四、MV-H基因(450nt nt628-1080)核苷酸片段序列测序分析结果：按N基因选择毒株条件取18株H基因RT-PCR阳性株，做450nt片段测序分析，结果同样显示SY2 China97为ED-like组基因型，其它17株均属新基因型，与其它国家报道的MV流行株450nt H基因无根基因树形见图2。
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