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脑不对称 Balb c 小鼠血浆IL |
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Key words：Brain lateralization Neuroimmunoendocrine Cytokines ▲
机体在发育过程中形成了脑不对称性（Brain lateralization）。脑不对称性是一个普遍的生物学现象，对机体许多功能有明显影响。因手功能的不对称性是脑不对称性最明显的表现，研究上常按手功能不对称性的不同将人群区别为惯用左手者（左利，Left -hander，LH），惯用右手者（右利，Right-hander，RH），无明显惯用手者（双利，Ambidextrous-hander,AH）。自从80年代Geschwind报道了左利人群有较高的免疫紊乱发生率后，研究者运用伸爪取食法区分出左利和右利动物, 深入研究脑不对称性对免疫功能影响及可能的机制。正常状况下左利和右利动物T细胞、Mφ细胞、NK细胞活性不同，用LPS腹腔注射动物模拟细菌感染和炎症性疾病的情况下，左利和右利动物血浆ACTH和皮质酮（Corticosterone，CS）上升幅度亦与脑不对称性有关［1］。神经免疫内分泌网络在免疫紊乱发病机制中起的作用，越来越受重视，IL-1、IL-6和CS是其中的重要因子。为探讨左利者免疫紊乱发生率高的原因，有必要研究脑不对称性对神经免疫内分泌网络的影响。为此，本文研究了脑不对称性Balb/c小鼠正常状况及受LPS 刺激后血浆IL-1β、IL-6和CS的水平变化。
1 材料与方法
1.1 实验动物 Balb/c健康小鼠，雌性，4周龄，由中山医科大学实验动物中心供应。在本实验室喂养，5只/笼，自由饮水取食，每天保持12 h明暗环境，行为测试及最后的实验均在上午进行。
1.2 左利和右利动物模型的建立 动物适应环境1 w后经伸爪取食法区分为左利、右利和双利3组。方法如下：小鼠禁食12～18 h后，置于一特制盒内，盒子体积为4.5 cm×4.5 cm×6.0 cm，前壁中央连有一小管可供放入小饲料块，以小饲料块逗引小鼠伸爪取食，观察其50次伸爪取食中伸右爪次数，记为右利分（Right paw entry,RPE)。2 w内共测试4次，第1次作为训练，不记录，将余下3次右利分平均，0～20分为左利鼠(Left-pawed mice)，21～29分为双利鼠(Ambidextrous mice)，30～50分为右利鼠(Right-pawed mice)［2］。区分后1 w，实验组每只小鼠以LPS(Escherichia coli serotype 026:B6, Sigma) 5 μg/ 0.5 ml无菌生理盐水，正常对照组用0.5 ml无菌生理盐水（NS），腹腔注射。注射后2 h和4 h分别快速断头杀鼠。用置于冰上并肝素化的试管收集小鼠血液，3 000 r/min离心15 min后取血浆，分装后置于－30℃保存待测。
1.3 血浆IL-1β和IL-6检测 用ELISA法检测，使用由深圳晶美公司提供的ENDONGEN公司生产的小鼠IL-1β、IL-6 ELISA试剂盒。按说明书使用，A值用SPSS软件绘出标准曲线，计算各样本的值。
1.4 血浆CS检测 肝素抗凝血浆10 μl加无水乙醇240 μl 于Eppendorf管，振荡混旋10 s，10 000 r/min 离心10 min，取上清50 μl入一小玻璃试管，每个样品设2管，40℃，15 min真空离心干燥，即为制备的样品管。同时设已知CS含量的质控管，用3H-CS、CS结合蛋白进行放免测定。
1.5 统计方法 用SPSS和EXCEL软件对各组血浆IL-1β、IL-6、CS水平进行单因素方差分析（ANOVA）。
2 结果
2.1 Balb/c 小鼠脑不对称性分布模式（图1） 左利小鼠28只（RPE在0～20之间），右利小鼠30只（RPE在30～50之间），双利小鼠18只（RPE在21～29之间）。左利小鼠的RPE主要在15～20间,右利小鼠的RPE在35～40间。
图1 Balb/c雌性小鼠RPE(Right paw entry)分布
Fig.1 Distribution of paw preference in the population of Balb/c female mice.Paw preference is represented as the RPE score
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