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从半合成噬菌体抗体库中筛选抗角蛋白人抗体 |
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王刚 化冰 王琰 刘玉峰
摘 要：目的：从半合成噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白抗体并进行鉴定。方法：以表皮角蛋白为抗原，通过吸附-洗脱-扩增过程从半合成噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白抗体，对其抗原结合活性和序列进行分析鉴定。结果：经过4轮筛选，获得20个能与角蛋白结合的阳性克隆，其中可产生特异性抗角蛋白抗体的克隆18个。经DNA指纹分析，判断所获克隆分别包含4个不同的Fab段基因。经切除基因Ⅲ后1个克隆表达出可与角蛋白特异性结合的可溶性Fab，序列分析表明其Vκ和VH分别属于Vκ1亚群和VH1亚群，VH CDR3序列符合半合成抗体库构建时的引物设计。结论：利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫制备出高特异性的人源性抗角蛋白抗体。
关键词：噬菌体抗体库 角蛋白 人单克隆抗体
分类号：R392.11
Cloning of human anti-keratin antibodies from semisynthetic phage antibody library
WANG Gang
Navy General Hospital,Beijing 100037
HUA Bing
Navy General Hospital,Beijing 100037
WANG Yan
Navy General Hospital,Beijing 100037
Abstract：Objective:To clone human anti-keratin antibodies from semisynthetic phage antibody library.Methods:Panning of semisynthetic phage antibody library against human epidermal keratin was conducted to select specific antibodies.The antigen binding activity and DNA sequence were determined and analyzed.Results:After 4 rounds of panning,20 positive clones were obtained and 18 clones were found to be able to bind keratin antigen specifically.DNA fingerprinting of the 18 clones showed 4 different digestion patterns representing 4 different positive clones.One of them could express soluble anti-keratin Fab antibody after removing the gene III fragment.DNA sequence analyses showed the Vκ and VH belonged to human Vκ1 subgroup and VH1 subgroup respectively.Conclusion:It is feasible to isolate human anti-keratin antibodies by-passing immunization using phage antibody library.
Key words：Phage antibody library Keratin Human antibodies▲
人体内天然存在的抗角蛋白自身抗体(Ak auto Ab)是维持机体免疫状态平衡的重要成员。在一些病理情况下(如银屑病、接触性皮炎等)Ak auto Ab的存在有利于限制病情的进展，对机体具有保护作用［1-3］。以往的研究发现，银屑病患者血清Ak auto Ab水平明显低于正常人，而输注高Ak auto Ab含量的人血丙种球蛋白收到了较好的疗效，并随着病情的好转，其血清Ak auto Ab也逐渐升高接近正常水平［4］。体外实验证明Ak auto Ab对培养角朊细胞的增生具有明显的抑制作用［5］，因此提示补充抗角蛋白抗体有可能成为银屑病等疾病新的治疗措施。由于鼠源单克隆抗体具有异源性，其在人体内的应用受到了限制，而人源性抗体的制备难度很大，抗体库技术的出现为[1] [2] 下一页
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