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郑黎燕 奚永志 孔繁华 金 荔 陈兴国 屠 敏 刘 楠 鱼咏涛
摘 要 目的： 为探索性构建重组人白细胞介素6-绿脓杆菌外毒素融合蛋白(IL6-PE40)以选择性杀伤高表达IL6受体(IL6R)的白血病细胞，本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)中克隆N-末端缺失24个氨基酸的人IL6基因(IL6 cDNA)并构建含此基因的重组质粒。方法：根据IL6基因序列设计合成可扩增IL6cDNA的特异性引物；利用基因重组技术，构建含IL6基因的重组质粒pUC-IL6。结果与结论：本文首次从HL-60中扩增出预期480 bp的IL6 cDNA，将其克隆至pUC18质粒中，命名为pUC-IL6，并经EcoRI/BamHI双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证，为进一步构建重组人IL6-PE40奠定了坚实基础。
主题词 白细胞介素6；基因；白血病；细胞
Cloning of IL6 gene from human promyelocytic leukemia cell line
ZHENG Li-Yan, XI Yong-Zhi, KONG Fan-Hua, YU Yong-Tao,
JIN Li, CHENG Xing-Guo, TU Min, LIU Nan
Department of Immunology, North TaiPing Road Hospital, Beijing (100039)
Abstract AIM:In order to construct recombinant interleukin 6-Pseudomonas exotoxin fusion protein (IL6-PE40) to selecting kill leukemia cells expressing high levels of IL6 receptors, we tried to clone IL6 gene from human promyelocytic leukemia cell line (HL-60) and construct the recombinant plasmid encoding IL6.METHODS：Two pairs of primes for IL6 were designed and synthesized according to the sequences of human IL6 gene derived from gene bank. A recombinant plasmid pUC-IL6 coding for IL6 was constructed by recombinant gene technique.RESULTS and CONCLUSION：The recombinant plasmid pUC-IL6 was constructed by cloning 480 bp IL6 cDNA fragment into pUC18 plasmid, confirmed by DNA sequencing and EcoRI/BamHI restriction enzyme digesting. The recombinant plasmid pUC-IL6 can be used to construct recombinant interleukin 6-Pseudomonas exotoxin fusion protein (IL6-PE40).
MeSH Interleukin-6; Gene; Leukemic; Cells
白血病病态造血最显著的特征之一，是通过自泌与旁泌路径获取维持其自泌性生长所必须的细胞因子。近年的研究表明，许多白血病细胞高表达并分泌IL6，自泌的IL6除直接刺激白血病细胞生长外，还与CSFs、IL1、IL3、IL4及SCF协同刺激白血病细胞的增殖，因此，IL6是AML及ALL的重要自泌因子。新近日、美学者又发现，IL6及IL6R基因明显表达在AML和AMLL(混合型白血病)细胞中，且大于50%的ALL细胞也高表达IL6R基因，而正常造血干/祖细胞几乎不表达或仅表达微量的IL6R。由此提示，IL6/IL6R系统在急性白血病的发生与发展中可能发挥重要作用［1～4］。同时，也为利用IL6/IL6R系统介导重组IL6-毒素融合蛋白靶向杀伤高表达IL6R的急性白血病细胞提供了充分的理论依据［1］。为了更及时地将这一新策略付诸于人类白[1] [2] 下一页
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