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低密度脂蛋白对培养的人肾小球系膜细胞的增殖作用及冬虫夏草对其的影响 |
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系膜细胞进行了纯化及传代培养，并进行了细胞鉴定；用密度梯度法分离血液获得低(高)密度脂蛋白并利用固相氧化法对其分别进行［125 I］标记。
二、系膜细胞对标记的低密度脂蛋白的结合和摄取：
将第3代细胞以2×104浓度接种于96孔培养板，置于培养箱中(37℃，5% CO2)孵育3～4 d细胞长至半汇合状态后，使细胞处于同步静止状态。将10 μg/mL碘标记的低高密度脂蛋白分别加入培养板孔内(n=8)，设空白对照，孵育5 h后，4℃ Hanks液充分漂洗：4℃ 0.5%三氯甲烷充分漂洗，用1 mol/L NaOH溶解细胞，室温下置24 h，收集细胞碎片，烘干滤纸进行放射计数测定。
三、低密度脂蛋白对系膜细胞增殖作用的影响：
浆系膜细胞同步静止后，加入不同浓度的低密度脂蛋白(5 μg/mL，10 μg/mL，50 μg/L，100 μg/mL，150 μg/mL，200 μg/mL，n=8)。每孔按 3.7×104 Bq加入［3H］胸腺嘧啶，设对照组。孵育24 h(37℃，5% CO2)，Hanks液充分漂洗及5%三氯乙酸洗涤，0.5%胰蛋白酶及0.02% EDTA(1：1)溶液溶解细胞，收集细胞碎片，进行放射计数测定。
四、冬早夏草对低密度脂蛋白产生的系膜细胞增殖的影响：
系膜细胞同步静止化后，加入不同浓度(100 μg/mL，200 μg/mL， 300 μg/mL， 400 μg/mL)的天然冬虫夏草，3.7×104 Bq/孔的［3H］胸腺嘧啶及10 μg/mL的低密度脂蛋白共同孵育24 h；北冬虫夏草(人工合成)实验组方法同上并同时设实验对照组：以下漂洗及溶解，收集细胞碎片，同位素计数测定。
五、统计方法：
数据以表示，采用t检验和方差分析。
结果
(一)系膜细胞的鉴定和脂蛋白的分离及标记结果：免疫组化标记结果、胞浆内结蛋白(desmin)、肌动蛋白(actin)、肌球蛋白(myosin)均为阳性表达、Ⅷ因子(F8)及角蛋白(cytokeratin)阴性。血浆脂蛋白的分离结果显示：碘标记的低(高)密度脂蛋白的放化纯度均达98.7%。
(二)系膜细胞对碘标记的低密度脂蛋白的结合摄取：结果显示：低密度脂蛋白组的放射counts.min-1(7304.0±974.0，n=8)明显高于高密度脂蛋白组(303.0±35.0，n=8)，P＜0.01。
(三)低密度脂蛋白对系膜细胞增殖作用的影响：见表1。
表1 不同浓度低密度脂蛋白对系膜细胞的影响
Tab 1 The effect of different concentration of LDL(low density
lipoprotein) on mesangial cells(,n=8)
Group Concentration of LDL
(μg/mL) Counts.min-1
Control 0 62.5±18.3
LDL 5 919.5±216.0*
10 1106.0±132.0**
50 1200.0±311.0**
100 1690.0±307.0**
150 511.8±105.0*
200 456.1±115.0*
*P＜0.05,**P＜0.01, vs control
(四)北冬虫夏草及天然冬虫夏草对低密度脂蛋白产生的系膜细胞增殖的影响：见表2。
表2 冬虫夏草对LDL引起的系膜细胞增殖的影响
Tab 2 The effect of Cordyceps on proliferation of
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