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钒钛磁铁矿尘对家兔肺泡巨噬细胞毒作用的体外研究 |
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2.卵壳膜盖片:取新鲜鸡蛋数个,经除钙壳、高压消毒后，将卵膜粘附于18 mm×18 mm盖玻片上，使之加热固定后即可接种细胞［1］。
3.实验分组:正常对照组(199培养液)、钒钛组、TiO2组、V2O5组和SiO2组，染尘浓度分别为25、50和100 μg/ml 3个剂量组。培养时间为8和16小时两个时间组。
4.AM培养染尘:取体重2.5 kg的健康雄性日本大耳白兔，按照Myrik［2］方法，用无菌生理盐水灌洗5次，获取AM，用含20%兔自身血清的199培养液配制成3×106/ml细胞悬液备用。于每一培养皿中置4片无菌盖玻片，每片加上述细胞悬液0.4 ml，于37℃培养3小时后，吸弃盖玻片上培养液并用无血清的199液冲洗，除去未贴壁的细胞，贴附的均为AM。加入上述各组相应浓度的粉尘悬液2 ml于每个培养皿中，而正常对照组只加入2 ml不含血清的199液，各组每次实验均作平行样本。染尘后，分别培养8和16小时（37℃），进行各指标观察及测定。
5. 观察指标:①细胞形态学：光镜下观察细胞形态分类计数和吞噬功能，透射电镜下观察AM形态、吞噬功能的超微结构。②AM存活率。③乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)测定。
结果
1.AM存活率：各组AM存活率，以V2O5组最低，SiO2组次之(表1)，经方差分析，各染尘组与对照组相比，V2O5组差异有非常显著性，SiO2组差异有显著性，钒钛组和TiO2组差异无显著性。各组AM存活率随培养时间延长有不同程度下降，但仅SiO2组差异有显著性。与染尘剂量间关系不甚明显。
2.LDH活性：染尘8和16小时，各染尘组LDH活性均明显高于正常对照组(表2)，经方差分析，差异有非常显著性，其中以V2O5组最高，SiO2组次之，钒钛组和TiO2组均较低。各染尘组随时间延长而下降，而随剂量的增加有不同程度的上升，以16小时50 μg/ml各染尘组间两两比较，V2O5组均明显高于SiO2组、钒钛组和TiO2组(P＜0.01);SiO2组高于钒钛组和TiO2组(P＜0.05)；钒钛组和TiO2组差异无显著性。
3.ACP活性：各染尘组在8和16小时，ACP活性均明显高于正常对照组(表3)，经方差分析，差异有非常显著性。随培养时间延长，16小时与8小时相比，以50 μg/ml为例，钒钛组(P＜0.05)和SiO2组酶活性有所升高，而TiO2组(P＜0.05)和V2O5组略有下降。各染尘组随剂量的增加，酶活性大多有所升高。各染尘组间两两比较，差异无显著性。
4.AM形态和功能变化：
（1）正常对照组: 细胞大小均匀，轮廓清晰，胞浆内未见吞噬颗粒。
（2）钒钛组: 细胞大小不均，形态各异，胞浆内见黑色吞噬颗粒及小空泡，个别细胞坏死崩解。电镜下见线粒体肿胀，核仁增大，胞浆内见大量吞噬小体。
表1 各组染尘家兔肺泡巨噬细胞存活率(n=5，，%)
分组 染尘8小时(μg/ml) 染尘16小时(μg/ml) 两两比较(q检验，16小时，50μg/ml)
25 50 100 25 50 100 对照 SiO2 V2O5 TiO2
钒钛 92
92
90
90
91
90
>0.05 <0.05 <0.01 >0.05
TiO2 95 91 91 88 91 91 >0.05 <0.05 <0.01
V2O5 6** 5** 1** 4** 5** 2** <0.01 <0.01
SiO2 91 91 90 87* 86* 85* <0.05
对照 96 96 96 95 95 96
与对照组相比*P<0.05，**P<0.01，下同
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