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内皮素在自发性高血压大鼠肾内小动脉重建中的作用 |
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不仅能引起VSMC的收缩，而且能促进VSMC的增殖［2］，因此ET与高血压动脉重建的关系受到密切关注。ET与一些实验性高血压及其动脉重建有着密切的关系，但ET在人原发性高血压及其动脉重建中的作用，至今还不清楚［3］。自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)的发病过程及主要病理变化与人原发性高血压非常相似，是研究高血压常用和理想的动物模型之一。已证实的ET受体有ETA、ETB和ETC、ETA广泛存在于心血管系统，在介导血管收缩反应和VSMC增殖都具有重要的作用，为此，本研究给予SHR口服型的ETA拮抗剂BMS-182874，通过BMS-182874对血压、肾内小动脉形态和血管阻力的影响，探讨ET与高血压肾动脉重建的关系。
材料和方法
1. 材料
雄性SHR和同种的正常血压大鼠Wistar-Kyoto(WKY)(上海市高血压研究所)，分为(1)WKY组：16周龄WKY；(2)SHR组：4周龄SHR，给予正常饮食，饲养至16周；(3)BMS组：4周龄SHR，口服BMS-182874(美国Squibb公司惠赠)100μmol/(kg.d)［4］，至16周。每组6只动物。
2. 方法
2.1 血压测量：10周后，每两周用电脑大鼠心率血压测量仪(MRB-ⅢA型，上海市高血压研究所)，尾套法测量1次尾动脉收缩压。
2.2 最小肾血管阻力(minimal renal vascular resistance,RVRmin)的测定：每组6只大鼠，经腹腔注射氯胺酮20mg/kg和安定20mg/kg复合麻醉。颈总动脉插管测颈动脉收缩压后，放血处死大鼠，迅速取出左肾，保留肾静脉、肾动脉及与肾动脉相连的一段腹主动脉。结扎腹主动脉远侧端，将其近侧端连接非循环式Langendroff离体灌流装置(恒压、恒温37.5℃)，以氧合Kreb液在12kPa(90mmHg)压力下灌注左肾，使肾血管处于最大舒张状态，然后测量该压力下左肾静脉的每分钟液体流出量Q0。实验完毕，剪去肾蒂，吸干肾表面的灌流液，称肾重，将每分钟液体流出量除以肾重，得到单位肾重每分钟流量Q1，根据R=(Pa-Pv)／Q分别计算总体和单位肾重RVRmin，式中R为血管阻力；Pa为动脉端压力，即实验中的灌注压；Pv为静脉端压力，本实验中可认为是0，Q为液体流量。
2.3 肾内小动脉几何形态学研究：上述离体肾灌流后，以多聚甲醛-戊二醛12kPa下灌注固定。间隔取垂直于其纵轴的数个薄片，厚约2～3mm，常规脱水、石蜡包埋、横切片，片厚3μm。切片经常规脱蜡入水，酸性茜素蓝染至血管平滑肌呈紫红色。选择圆形或近圆形动脉，用CA6300计算机图像分析系统(中国科学院自动化研究所)，测量动脉的内径、外径、壁厚和壁面积，计算壁厚与内径之比值。每组取4只大鼠，每肾取4张不同断面的切片。
2.4 肾内小动脉中膜的形态计量学：肾脏作振荡切片，片厚200μm，经0.1mol/L PBS漂洗过夜，锇酸后固定，脱水、浸透和聚合。在相差显微镜下，选外径在100～200μm之间的圆形小动脉。切下小动脉，进一步定位，修块，作超薄切片，Hitachi H-800型透射电镜(TEM)摄影。用计算机图像分析系统生成10×10网格，使网格纵线与电镜底片上VSMC或细胞间隙的长轴平行，测量有细胞核处VSMC及其间隙在各网格横线上的截距，以截距的平均值代表宽度。每组取3只大鼠，每只大鼠取1～2片切片，再各取1～2根小动脉，电镜下每根动脉测量4个不同部位，每一部位测3～4张底片。
2.5 结果的统计学处理：两组之间比较用t检验。
结 果
1.血压
10～16周时SHR血压显著高于同龄WKY(P<0.01)，BMS-182874未能降低SHR的尾动脉收缩压(P>0.05)(图1)。
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