|
供者抗原经门静脉输注诱导特异性免疫耐受的研究 |
| |
ml，PBS等倍稀释，加入2 ml Ficoll液面上，离心30 min(1 700 r/min)，取淋巴细胞层，PBS洗涤2次。
1.2.3 结果检测
1.2.3.1 混合淋巴细胞反应(MLR) 培养液采用RPMI 1640加10%人体白蛋白。培养瓶加入供受体脾细胞悬液各1 ml(1×108 ml-1)，细胞培养液5 ml，适量双抗(青、链霉素)。置于5%CO2孵箱37℃培养6 d，终止培养前12 h，按1×106单个核细胞加1 μCi3H-TDR。由液体闪烁计数仪测定cpm(脉冲数/分)值。
1.2.3.2 外周血T细胞亚群的检测 羊抗鼠CD8+单抗按1∶100效价每份标本加10 μl混合，37℃水浴30 min，加补体20 μl，台盼蓝染色后，计数200个以上淋巴细胞，计算CD8+淋巴细胞亚群的阳性细胞百分率。
1.2.3.3 移植心T细胞亚群检测 取排斥心脏标本，液氮保存，冰冻切片，丙酮固定10 min，0.3%H2O2甲醇溶液充分水洗30 min，2%血清覆盖组织，置37℃烘箱10 min，直接滴加CD8+抗体(1∶100效价)于组织上。再次孵育30 min，滴加ABC复合物，再经DAB-H2O2显色后裱片。
1.2.3.4 移植心排斥后标本 作病理检查。
1.3 实验分组 采用麻醉下开腹，将不同供者抗原一次性分别注入配对受者门静脉，注射总量为1 ml，细胞悬液浓度为1×108 ml-1共分3个实验组和1个对照组，各组样本量5只。对照组输注等量RPMI 1640液，其余3个实验组抗原种类分别为DST、DSSL和DSBM。环孢素A(CsA)剂量各组均为5 mg/(kg．d)，管喂，术前6 d至术后28 d。
2 结果
2.1 移植物存活时间和混合淋巴细胞反应 见表1、表2。
表1 移植物存活时间
Tab.1 Time of the grafts survival
Group Antigens Surviral time(day) ±s
1 CsA 8,13,17,11,14 12.6±3.4
2 DST+CsA 38，45，30，25，38 35.2±7.8
3 DSST+CsA 55，50，49，48，60 52.4±5.0
4 DSBM+CsA 80，87，76，60，66 73.8±10.8
Note:n=5,P＜0.004
表2 混合淋巴细胞反应(MLR)
Tab.2 The outcome of 4 group mix lymphocyte reaction (MLR)
Antigens n Time of postoperation MLR (cpm) ±s
CsA 5 7 9 955，12 310，12 531，9 086 10 971±1 714
DST+CsA 5 7 9 901，8 714，7 210，7 140，8 039 8 201±1 150
4 21 6 609，6 147，6 540，7 101 6 599±392
DSSL+CsA 5 7 8 890，8 901，8 357，8 151，7 454 8 351±600
5 21 4 103，5 008，4 980，5 014，3 940 4 609±540
DSBM+CsA 5 7 7 405，8 151，8 357，7 494，7 005 7 682±558
5 21 4 196，3 725，2 866，2 913，3 210 3 382±569
Note:P＜0.023
2.2 术后7 d外周血T细胞亚群(CD8+) 检测移植后7 d对照组和实验组T细胞亚群(CD8+)的变化，发现实验组与CsA对照组间存在明显统计学差异(P＜0.001)，而各实验组间的变化无统计学意义(P＞0.163)。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 组织蛋白酶D在乳腺良 恶性病变中的表达及意义
下一个医学论文： 可溶性HLA
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文