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, heat shocked cells showed less apoptotic cells, no specific DNA ladder pattern agarose gel electrophoresis, and less increase of percentage of DNA fragmentation. Further, it was found that heat shock pretreatment induced expression of HSP70, and inhibited TNF-αmediated I-κBα degradation, NF-κB translocation, NF-κB binding activity, and iNOS expression.CONCLUSION： Heat shock pretreatment could protect BPAEC against TNF-α induced apoptosis, and its mechanism might involve HSP70 inhibition of TNF-α mediated NF-κB activity and iNOS expression.
MeSH NF-KAPPA B; Heat-shock proteins; Endothelium; Nitric oxide; Tumor necrosis factor
近年来，血管内皮细胞(endothelial cell)作为机体调节心血管系统稳态最大的内分泌器官越来越受到重视。在病理情况下，由于内皮细胞处于血液与组织间的独特位置，诸多因素如激活的白细胞、活性氧、细胞炎性因子等都可损伤内皮细胞，造成内皮细胞功能障碍。目前认为，内皮细胞损伤在创伤、休克、成人呼吸窘迫综合征、多器官功能衰竭、动脉粥样硬化等疾病过程中起着重要作用［1］。近年来的文献报道，内皮细胞损伤除以“坏死”形式出现外，更为重要的是可发生“凋亡”。我室最近的工作亦表明，肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)可致牛肺动脉内皮细胞(bovine pulmonary artery endothelial cell, BPAEC)凋亡，其机制与TNF-α激活核转录因子-κΒ(nuclear factor-kappa B, NF-κB)，促进诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)生成，从而生成的大量一氧化氮(nitric oxide, NO)有关。
内皮细胞保护措施的研究以往主要集中在药物如抗氧化剂、蛋白酶及脂酶抑制剂、锌、硒以及某些中药对内皮细胞的保护作用［2］。通过增强机体自身的抗损伤能力以达到防治疾病的目的日益受到医学家们的重视。我室以往的工作证实，热休克反应能诱导70 kD-热休克蛋白(heat shock protein-70 kD，HSP70)合成从而增强肺动脉内皮细胞抗损伤能力［3，4］。近来的文献报道热休克反应可抑制NF-κB活化，阻断促炎因子的表达，Wong等对肺上皮细胞株MLE-15的研究发现，热休克反应能阻断I-κBα降解，抑制NF-κB的转位，从而抑制iNOS的基因表达［9］。因此我们推测热休克预处理能通过抑制NF-κB的活化，阻断iNOS的转录合成，最终减轻TNF-α所致的内皮细胞凋亡。
材料与方法
一、材料：
DMEM培养基，Gibco产；无支原体小牛血清，杭州四季青生物工程公司产；重组肿瘤坏死因子-α(recombined tumor necrosis factor-α,rTNF-α)，军事医学科学院产；十二烷基磺酸钠(SDS)，琼脂糖、Hoechst 33258,辣根过氧化物酶标记(HRP)的兔抗鼠IgG或羊抗兔IgG，Sigma产；蛋白酶K、RNA酶，生命技术公司产；丙烯酰胺、N，N’-亚甲基双丙烯酰胺，Fluka产 ；鼠抗HSP70单克隆抗体，Upwards Biosystem 产；鼠抗iNOS单克隆抗体，Transduction Laboratories产；兔抗I-κBα上一页 [1] [2] [3] 下一页
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