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抗菌肽D基因导入番茄及转基因植株的鉴定 |
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田长恩 王正询 陈韬 周玉萍 黄自然 黄亚东
摘 要：用花粉管通道法将柞蚕抗菌肽D基因导入番茄，获得了转基因植株。应用PCR技术、DNA斑点杂交以及Southern印迹分析表明，抗菌肽D基因已整合到番茄基因组；而且，位于目的基因下游的胭脂碱合成酶基因有表达。青枯假单孢菌活体接种结合高发病大田种植试验结果显示，部分转基因植株的子一代具有较强的抗青枯病能力。
关键词： 抗菌肽D基因； 花粉通道法； 番茄； 青枯病
中图分类号： Q78； S330 文献标识码： A 文章编号： 0253－9772(2000)02－0086－04
Transfer of Antibacterial Peptide D Gene into Tomato and Identification of Transgenic Plants
TIAN Chang-en WANG Zheng-xun CHEN Tao ZHOU Yu-ping
（Department of Biology, Guangzhou Teacher s College, Guangzhou 510405）
HANG Zi-ran HANG Ya-dong
（Department of Sericulture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642，China）
Abstract:By using pollen-tube pathway,antibacterial peptide D(AP-D) gene developed from Chinese oak silkwarm was transferred into tomato.PCR,dot and Southern blot analysis confirmed that stable integration of AP-D gene into the tomato genome had occurred.The expression of NOP gene which was localized at downstream of AP-D gene was confirmed with nopaline detection.In comparision with non-transgenicplants,some transgenic plant expressed a stronger resistance value to bacterialwilt disease (Pseudomonas solanacearum).
Key words: antibacterial peptide-D gene; pollen-tube pathway; tomato; bacterialwilt
70年代中期，人们发现天蚕在各种理化或生物因子刺激下，在其血淋巴中可诱导产生抗菌肽（cecropins）等物质。抗菌肽具有极强的杀菌或抑菌能力，且其杀、抑菌谱广泛，对诸如绿脓杆菌、大肠杆菌和金色葡萄球菌等人畜病原菌〔1〕，以及烟草〔2〕、马铃薯〔3〕青枯病和水稻白叶枯病〔4〕等植物病原菌均有杀、抑作用。抗菌肽D由36个氨基酸组成，其结构已有较为详尽的研究〔5〕。徐飞等根据抗菌肽的氨基酸组成结构人工合成了抗菌肽D(AP-D:antibacterial peptide-D)基因〔6〕，共122bp。因此，将抗菌肽基因导入植物，探索增强作物抗细菌病能力已完全可行。
番茄是一种世界性蔬菜，具有很高的经济价值。但其病害多，其中尤以青枯病等细菌病的危害广而重〔7,8〕。业已发现，将抗菌肽基因导入烟草〔2〕、马铃薯〔3〕和广藿香〔9〕皆可增强这些作物对青枯病的抗性。因此，若将抗菌肽基因导入番茄，可为番茄抗青枯病育种提供新的种质资源。花粉管通道法是一种简单实用的外源基因导入法，已在棉花〔10,11〕、水稻〔12〕和玉米〔13〕等作物的遗传转化中得到成功应用。本文报道了此法在番茄遗传转化中的应用以及转基因植株的分子检测和抗青枯病的初步鉴定结果。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 转化用重组质粒 由华南农业大学蚕桑系黄自然教授提供，将抗菌肽D基因(AP-D gene)置于CaMV 35S下游，其两端有EcoRI的酶切位点，抗菌肽D基因的下游是胭脂碱合成酶基因([1] [2] 下一页
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