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妊娠小鼠子宫内膜LIF基因表达的研究 |
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翁亚光 王应雄 刘学庆 何俊琳 陈雪梅
摘 要：本文对妊娠第4天(Ⅰ组)、第7天(Ⅱ组)、第10天(Ⅲ组)的小鼠(各20只)子宫内膜LIF基因表达进行了研究。Ⅰ组20只小鼠子宫内膜全部存在LIF基因的表达、Ⅱ组有5只小鼠表达、Ⅲ组仅有1只小鼠表达。文中对不同孕期LIF基因的表达程度与胚胎着床的关系进行了讨论。
关键词： 白血病抑制因子； 基因表达； 子宫内膜； 小鼠
中图分类号： Q786 文献标识码： A 文章编号： 0253－9772(2000)02－0073－02
Expression of Leukenia Inhibitory Factor in Mouse Endometrium
WENG Ya-guang， WANG Ying-xong， LIU Xue-qing， HE Jun-ling， CHEN Xue-mei
（Department of Genetics,Chongqing Univercity of Medical Sciences, Chongqing 400016，China）
Abstract:Leukemia inhibitory factor(LIF)is a glycoprotein with multiple activities and is essential for blastocyst implantation in mouse.We have examined LIF gene expression in mice endometrium on day 4(group Ⅰ),day 7(group Ⅱ),day 10(group Ⅲ)of pregnancy.In group Ⅰ all had LIF gene expression,5 mice had LIF gene expression in group Ⅱ,only one mouse had LIF gene expression in group Ⅲ.We discussed the relation between level of LIF gene expression and embryonic implantation.
Key words: leukemia inhibitory factor; gene expression; endometrium; mouse
白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一种多功能活性的分泌型糖蛋白，因其能诱导小鼠M1型白血病细胞分化为巨噬细胞和抑制白血病细胞增殖而命名。近年来，国外学者相继证实，白血病抑制因子具有抑制胚胎干细胞的分化并保持其增殖能力的作用，同时在胚胎的着床及胚胎的早期发育中起着重要的作用。本文用RT-PCR方法对不同孕期的小鼠子宫内膜的LIF基因表达进行了研究。
1 材料和方法
1.1 实验取材
本实验用本校实验动物中心的NIH小鼠，将孕期为4d、7d、10d的小鼠分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，每组20只。
1.2 总RNA提取
将子宫内膜组织置于碾磨器内，加入1ml RNA提取液充分碾碎，取混合液于1.5ml离心管内，加入200μl氯仿，颠倒混匀，在室温下静置15min，15 000r/min离心15min，取上清液置于1.5ml离心管内，再加入等体积异丙醇混匀(此时可见管中絮状沉淀物即为总RNA)，4℃条件下放置1h以上，12 000r/min离心15min，弃上清液，加入适量的70％～75％乙醇洗涤,1％～75％乙醇溶液内保存于－20℃冰箱中备用。
1.3 采用TitanTM单管RT-PCR系统(宝灵曼公司)在同一反应管内进行cDNA合成和PCR扩增。
1.3.1 主混合物1 10 mmol/L浓度的dATP、dCTP、dGTP和dTTP各1μl，0.3μmol/L浓度的引物1、引物2,引物参照NicholasmM.Gough等设计〔1〕，引物1: 5′－cctcttcccatcacccctgta－3′;引物2:5′－agaaggcctggaccaccacact－3′，2μl RNA溶解酶(模板RNA，约含2μg总RNA)，100 mmol/L浓度D[1] [2] 下一页
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