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茶对小鼠免疫功能的保护作用 |
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，如茶多酚、茶色素等，具有抗氧化、抗衰老、抗突变，降血脂及抗癌等多种生物学活性［6］。我们曾报道了绿茶对C57/BL6J小鼠Lewis肺转移癌的抑瘤效果及免疫调节作用［7］。本研究我们用致癌剂量的NNK诱发小鼠，以腹腔巨噬细胞吞噬功能、外周血白细胞化学发光(chemiluminoscence of white blood cells in peripheral blood，WBC-CL)、脾细胞抗体生成细胞数(或称空斑形成细胞，plaque formating cell，PFC)、迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity，DTH)以及天然杀伤细胞(natural killer，NK)活性等非特异、体液或细胞免疫的代表性指标，观察小鼠免疫功能在4周内的动态变化规律；同时研究绿茶(green tea，GT)、复合茶(mixed tea，MT)和茶多酚(tea polyphenol，TP)对NNK所致小鼠免疫功能改变的调节作用，进一步为阐明茶叶防癌与免疫调节的关系提供实验依据。
材料与方法
一、材料
雌性昆明种小鼠，体重18～20 g，购自军事医学科学院实验动物中心；NNK购自Chemsyn Science Lab(纯度>98%)；51Cr购自Amersham公司；YAC-1细胞由北京劳动卫生研究所赠送；GT(杭州炒青)、MT(绿茶提取物+茶多酚+茶色素)和TP(40%纯度)由中国农业科学院茶叶科学研究所提供；发光增强剂鲁米诺购自Sigma公司；酵母多糖购自上海第二军医大学放射医学教研室；鸡红细胞用健康雄性成年来杭公鸡血制备；绵羊红细胞用健康成年绵羊血制备；豚鼠血清由中国预防医学科学院环境卫生监测所毒理室提供；1640培养基为Gibco公司产品；其余为市售分析纯或优级纯试剂。
二、动物分组
实验动物随机分为正常对照(NC)、NNK对照(NNK-C)、1.0% GT+NNK(NNK+GT)、0.5% MT+NNK(NNK+MT)和0.5% TP+NNK(NNK+TP)5组，每组按不同处死时间又分为若干小组，每小组6只动物左右。
三、NNK配制及注射
按500 μmol/kg剂量称取NNK，加入1～2滴二甲基亚砜(终浓度<2‰)将NNK完全溶解，用生理盐水稀释后，过滤除菌，单次腹腔注射小鼠(每只0.5 ml)。
四、茶水、复合茶和茶多酚的配制
绿茶用沸水浸泡两次(每次20～30 min)，合并两次浸出液配成浓度1.0%的茶水；复合茶和茶多酚用凉开水配成0.5%的溶液；从注射NNK前7天起供小鼠自由饮用；每日更换新鲜茶水、复合茶或茶多酚水溶液，并记录动物饮水量，直至处死。NC和NNK组饮凉开水。
五、观察指标
1.用体内YAC-1细胞清除试验测量小鼠NK活性［8］：将处于指数生长期的YAC-1细胞用51Cr标记，并调整YAC-1细胞浓度为2×106/ml。取0.5 ml细胞悬液用γ计数器测量放射性活性(cpm值)作为注射YAC-1细胞的总cpm值，每鼠经尾静脉注射0.5 ml，1小时后放血处死小鼠，完整取出肺、脾和肝，测量残存的cpm值，用YAC-1细胞的残存百分数表示体内NK活性水平，YAC-1细胞残存率越低，表明NK活性越高。
2.用整体腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的方法评价巨噬细胞功能［9］：实验前2小时腹腔注射0.2 ml 10%鸡红细胞，实验时取出小鼠腹腔液，用电动离心涂片机制片，经风干、固定、染色后，油镜下计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数，计算吞噬率(%)。
3.用鲁米诺依赖的酵母多糖刺激法测定WBC-CL［10］：每份样品分别测量基础化学发光(bCL)和激活化学发光(aCL)，用PBS缓冲体系，测量体积1 ml，bCL测量管含0.1 ml血和0.1 mmol/L鲁光诺，aCL测量管含0.1 ml血、0.1 mmol/L鲁米诺和0.1 mg/ml酵母多糖，于37℃测量10秒发光计数，间隔180秒测量一次，连续测量1小时，结果以103个WBC的发光强度(cps/103 WBC)表示。
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