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十株产色素非O1群霍乱弧菌的发现与研究 |
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3.方法:细菌DNA碱基（ G+C）检测采用热变性法;电镜观察采用负染色法;小白鼠毒力试验、反向被动血凝试验和山梨醇发酵试验按文献［6］进行;药敏试验采用Kirby-Bauer法;采样、增菌、分离、纯培养、生化反应和分型鉴定等按文献［6］进行。
结果
1.产色素非O1群霍乱弧菌的发现：4年来检查河、塘水样840份，分离到弧菌科细菌675株，其中非O1群霍乱弧菌394株，占58.37%，居首位，麦氏弧菌次之，(225株)拟态弧菌、创伤弧菌、河弧菌、气单胞菌、邻单胞菌等不多见。
1994年6月，首次在河、塘水中分离到4株产褐色色素的革兰阴性弧状菌，菌体形态非常典型,在36℃碱性胨水中培育6小时后生长旺盛，并有明显菌膜,在弧菌选择性和非选择性培养基上均呈现良好生长态势，系列生化反应结果完全符合非O1群霍乱弧菌，后经中国药品生物制品检定所鉴定并正式命名。1996、1997年再次先后检出6株，前后共分离到10株产色素非O1群霍乱弧菌(附表)。
附表 产色素非O1群霍乱弧菌的分离与水源环境因素
时间
(年) 菌号 标本
来源 水温
(℃) pH值 氯化物
(mg/L) 亚硝酸盐
(mg/L)
1994 C940607、
C940612 塘 水 26.0 7.4 - -
C940613、
C940616 老河水 26.0 7.2 - -
1996 C960506、
C960515 新河水 23.0 7.1 8.80 0.010
1997 C970604、
C970605 新河水 27.5 7.2 2.13 0.001
C970606、
C970720
-为未测
2.生物学性状研究:
(1)形态与染色: 新分离的产色素非O1群霍乱弧菌为革兰阴性短小稍有弯曲的弧状菌，菌体两端钝圆，无芽胞、无荚膜，一般长2.0～2.5 μm，宽0.3～0.5 μm。在电子显微镜下，菌体形态柔和，稍有弯曲，两端钝圆，单端有一根长鞭毛，长度约为菌体的2倍左右。运动极为活泼，在暗视野显微镜下观察，呈现流星样运动。
DNA G+C检测含量为470.4 mol/L，在弧菌属细菌范围内(400～500 mol/L)。
（2）培养特性：在碱性胨水中生长迅速，36℃ 6小时培育后呈现均匀混浊，无沉淀，但有明显菌膜形成。
在弧菌选择性和非选择性培养基上生长良好。36℃ 24小时培育后，在碱性胆盐琼脂上菌落呈现：圆形、光滑、湿润、扁平、半透明，边缘整齐和浅灰色，直径1.5～2.5 mm。在4号琼脂上菌落呈现：稍透明、光滑、湿润、扁平、圆形，边缘整齐和淡灰色、中心点状褐色，直径2.5～3.0 mm。在TCBS琼脂上，因该菌分解蔗糖故菌落为黄色、圆形、光滑、湿润、稍有凸起，边缘整齐、不透明，直径1.0～1.5 mm。在血琼脂上菌落呈现：圆形、光滑、湿润、稍凸起、边缘整齐、半透明和灰色，除C970720菌外，周围均出现透明的溶血环，环径1.0 mm左右。该菌在碱性胆盐琼脂、血琼脂和营养琼脂斜面上经36℃培育24小时后，菌落周围和培养基中均出现明显的水溶性褐色色素，且随着培养时间的延长逐渐加深。
（3）生化反应 ： 产色素非O1群霍乱弧菌氧化酶和硝酸盐还原试验阳性，而精氨酸双水解酶阴性，V-P、靛基质试验阳性，液化明胶，分解葡萄糖，甘露醇、蔗糖、麦芽糖产酸不产气，不分解乳糖、阿拉伯糖、纤维二糖和水杨素，不产生H2S，在无盐和3% NaCl胨水中生长良好，而在>6%的NaCl胨水中不生长。
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