|
A 31 |
| |
ificantly as compared with that of control, group ApoE4 and group Aβ-31-35(10μmol/L)(P＜0.01);(4)The longest process length,the total neurite length,the average neurite and the average gray degrees of ChAT-positive neurons were decreased significantly in group Aβ-31-35+ApoE4 and group Aβ31-35(20μmol/L) as compared with those of control(P＜0.05),the decrease of the gray degrees of ChAT-positive neurons indicated that Aβ31-35+ApoE4 and Aβ31-35 reduced choline acetyltransferase activity(ChAT).ApoE4 had no significant effect on survival and morphology of the basal forebrain neurons. Conclusion The combination of Aβ31-35 with ApoE4 is more neurotoxic than that of Aβ31-35 alone,which implies that ApoE4 may play an important role in enhancing the neurotoxicity of Aβ31-35.
【Key words】 Beta amyloid protein(31-35); Apolipoprotein E4; Basal forebrain; Cholinergic neurons
β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)是老年斑(senile plaques,SP)的主要成分之一，是由39～43个氨基酸组成的多肽。SP是构成老年性痴呆(Alzheimer disease,AD)病人脑中神经病理改变的主要成分。它在脑内的产生和沉积与AD的病理过程有着密切的联系，其确切机制还不清楚。研究表明不同片段的Aβ在不同的生理状态和条件下有不同的生物活性——神经营养和神经毒性作用［1，2］。载脂蛋白E4(apolipoprotein E type 4 allele,ApoE4)是晚发家族性AD和散发性AD的主要危险因子，在SP中也证实有ApoE4的沉积［3］，它在AD发病中的作用还有待于阐明。体外研究显示，ApoE4易与Aβ结合形成一难溶复合物［4］。目前对它们相互结合机制的研究较多，但两者共同作用对神经元影响的研究较少，尤其是对基底前脑胆碱能神经元的作用未见文献报道。故本实验通过从体外来研究Aβ31-35和ApoE4对培养的大鼠基底前脑神经元存活和生长的影响，为揭示它们在AD病理中的作用提供资料。
材料和方法
1. 动物和试剂
孕18～20d的SD大鼠(由中山医科大学动物中心提供)，单克隆抗神经丝抗体，胆碱乙酰转移酶(ChAT)抗体、Aβ(31-35)、MTT、多聚赖氨酸、ApoE4(均为Sigma公司产)，胎牛血清(杭州四季青生物工程公司产)，DMEM/F12(GiBCO公司产)。
2. 神经元的培养
戊巴比妥钠(40mg/kg)经腹腔麻醉SD孕鼠，在无菌操作下取出胎鼠，分离出基底前脑，置于盛有D-Hank液的青霉素瓶中，将组织剪碎，加入0.125%的胰蛋白酶，消化15～20min，用含有15%胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化，经悬浮、离心、过滤后收集细胞，按1×105个细胞/毫升的密度接种在预先涂有多聚赖氨酸的96孔板内；按2×105个细胞/毫升的密度接种在24孔培养板内的盖玻片上(0.8×0.8cm2)，待细胞贴壁后换含B27添加剂的无血清培养基。将细胞分组并分别加入等体积的5mg/L、10mg/L、20mg/L的ApoE4，10μmol/L、20μmol/L的Aβ(31-35),ApoE4(10mg/上一页 [1] [2] [3] 下一页
上一个医学论文： 大鼠上涎核的传出神经纤维与翼腭神经节中的VIP
下一个医学论文： 应用氢呼气试验测定食物口
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文