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核酸序列扩增系统与套式RT |
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谢鹏 岩田泰秀 高桥和郎 森则夫
核酸序列扩增系统(nucleic acid sequence based amplification,NASB
A)的特点是具有直接扩增特异性单链RNA的能力，并在3种酶(AMV逆转录酶、RNA酶H、T7 R
NA聚合酶)的作用下形成转录和逆转录交替转换，通过反复的聚合反应引起模板RNA的持续
扩增。为了比较和选择一种方便、快速、有效的检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,
BDV)的方法，我们用NASBA与套式RT-PCR进行检测BDV p23基因片段的方法学比较。
用NASBA和nested RT-PCR对10fg/μl至1ng/μl的10倍级差的不同浓度的BDV/
MDCK标准病毒
作者单位：400016 重庆医科大学神经精神疾病研究所(谢鹏)；日本福岛医科大学微生物
教研室(岩田泰秀，高桥和郎)；日本滨松医科大学精神神经科(森则夫)
株进行方法学检测。结果表明，用NASBA检测BDV p23基因片段的最低可检测浓度为1000f
g/μl,而nested RT-PCR则为10～100fg/μl。试验用Northern班点杂交和South
ern印迹分别证实结果，肯定为特异性反应，结果均准确可靠。但单纯电泳不能作为NASBA
的结果判断检查，对12例nested RT-PCR检测BDV p23基因片段呈阳性的精神病病人和健
康献血者的PBMC标本，用NASBA检测仅1例呈阳性。
尽管NASBA较nested RT-PCR的实验操作非常简单，需时少，干扰实验结果的因素少，
但NASBA的检测灵敏度却明显较nested RT-PCR低，故nested RT-PCR，仍不失为目前检
查人体PBMC中BDV病毒核酸的较敏感的方法。
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