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EBV |
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陈宜芳 郭辉玉 汪慧民 李满枝
作者单位：510089 广州，中山医科大学
孙逸仙纪念医院(陈宜芳)；
微生物教研室〔郭辉玉(导师)〕；
肿瘤研究所(汪慧明，李满枝)
本课题受美国中华医学基金会资助，为博士学位论文部分工作
EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)的潜伏感染与多种人类肿瘤有关，EBV在潜
伏状态时，至少有11种基因表达，其中潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP
1)在细胞转化和肿瘤形成中的作用尤为重要，故LMP1基因已被认为是病毒的一种癌基因，
本文研究EBV-LMP1基因对上皮细胞增殖的影响，探索LMP1在上皮细胞肿瘤发生中所起的作
用。
用长片段DNA PCR扩增试剂盒(Boehringer Mannheim公司产品)从EBV原型株B95-8
细胞DNA中扩增出LMP1全基因，包括LMP1基因的上游调控序列、LMP1编码序列的三个外
显子、两个内含子及下游polyA信号序列。首先建立EBV-LMP1基因的真核表达质粒pcDN
A3-LMP1,用Lipofectin reagent(Gibco公司产品)将质粒DNA转染入293细胞(人胚肾
上皮细胞株)，传代于含200μg/ml G418 的选择培养液中，直到抗性细胞克隆形成。用EB
V-LMP1单克隆抗体CS1~4(由英国伯明翰大学肿瘤研究所惠赠)，按LSAB法(Dako
公司产品)进行免疫组化染色，证实LMP1基因转染的293细胞呈阳性反应，LMP1
主要分布于胞浆及膜上，而空载体转染及未转染293细胞均为阴性。将LMP1基因转染细
胞在软琼脂内培养，并以空载体转染及未转染细胞为对照，发现LMP1基因转染细胞于培养7
天左右即可形成多个集落，至14天时集落明显增大，集落数目增多，而空载体转染及未转染
细胞仅偶见个别较小集落，早期即停止生长。MTT实验显示，LMP1基因转染的293细胞的M
TT吸收值明显大于空载体转染及未转染293细胞。对三种培养细胞进行了PCNA(增殖细胞核抗
原)的检测，结果表明，LMP1基因转染细胞的PCNA阳性率(80.0%)明显高于空载体转染及未
转染细胞(分别为61.1%、62.3%),显著性检验P＜0.01。
以上研究表明，LMP1基因转染的上皮细胞呈现生长旺盛，失去接触抑制，在软琼脂中能够
形成多个细胞集落，细胞增殖功能增强。说明LMP1基因能明显改变上皮细胞的生物学行为，
促进细胞的生长、增殖和转化，使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。提示EBV-LMP
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